有机化学2色谱法.docVIP

实验名称:薄层色谱和柱色谱 一、实验目的： 1、学习薄层色谱和柱色谱技术的原理和应用。 2、掌握薄层色谱和柱色谱分离技术和操作要点。 3、掌握如何正确的配置展开剂。 二、实验原理 色谱法的基本原理，是利用混合物各组分在固定相和流动相中分配平衡常数的差异。简单地说就是，当流动相流经固定相时，由于固定相对各组分的吸附或溶解性能的不同，使吸附力较弱或溶解度较小的组分在固定相中移动的速度较快，在多次反复平衡过程中导致各组分在固定相中形成了分离的“色带”，从而得到分离。 三、主要试剂规格及用量 1%偶氮苯的氯仿溶液，1%苏丹Ⅲ溶液，0.5%的羧甲基纤维素钠（CMC）水溶液，硅胶G，体积比为9:1的正庚烷-乙酸乙酯。 四、实验步骤 （一）薄层色谱实验步骤： 1、薄层板的制备. 2、取两块薄层板，分别在距一端1cm处用铅笔轻轻地画一条线，作为起始线。用分别两根毛细管，分别取少量1%苏丹Ⅲ溶液、1%偶氮苯的氯仿溶液和其混合液放在起始线上，取两个样点，且两样点相距1到1.5厘米，且样点的直径不超过2毫米。如果样点颜色太浅，可以等其变干后在重复几次。 3、用上述的正庚烷-乙酸乙酯作为展开剂，待样点干燥后，小心放入已加入展开剂的广口瓶中，点样一端应进入展开剂0.5cm，盖好瓶盖，观察实验现象，观察展开剂前沿上升至离板的上端1cm处取出，尽快用铅笔在展开剂上升的前沿处划一记号，比较两者的Rf值的大小。 （二）柱色谱实验步骤 1、 在色谱柱上端放一个干燥的漏斗，将吸附剂倒入其中，并轻轻的敲打色柱柱身使其填充均匀，然后加入洗脱剂湿润。 2、当溶剂下降到吸附剂表面时立即开始使用色谱柱，用滴管把样品溶液转移到上色谱柱中，并用少量溶剂分几次洗涤柱壁上所沾试液，直至无色。样品加完后，打开下旋塞，使样品进入石英砂层后，再加入洗脱剂进行洗脱。 3、在分有色物质是，直接观察到分离后的“色带”，然后用洗脱剂将分离后的“色带”依次自柱中洗脱出来，再用适宜的溶剂将溶质萃取出来。 五、注意事项 （一）薄层色谱 1、制板时，硅胶用水调成刚好能流动的糊状物为佳，勿太浓或太稀，并即刻铺在层析板上。做好的层析板应均匀一致，否则会影响分离效果。 2、点样量不能太大，否则会导致拖尾至使重点分离不完全。 3、展开剂不要加得太多（1~2ml即可），展开时不要把样点浸入展开剂中。 4、待溶剂前沿离层析板顶端仅1~2mm时方能取出，否则色点分离不完全。但溶剂不能冲顶，否则色点会扩散而影响分离效果。 5、展开结束后，应立即记下溶剂前沿的位置，并把色谱图照原样及时记录在报告本上，注明各点的颜色，并计算各点的Rf值。 6、本实验的色谱图上可出现3~6个色点，在此范围内色点越多，分离效果越好。 7、薄层层析不仅可用来分离有色物质，也可分离无色物质。 8、操作要小心，特别是点样时，不要损坏层析板。 9、实验完毕倒掉展开剂，层析缸不用洗。 （二）柱色谱 1、吸附剂必须均匀地填在柱内，没有气泡、没有裂缝，否则将影响洗脱和分离。 2、加入沙子的目的是使加料时不致把吸附剂冲起，影响分高效果。若无沙子，也可用滤纸覆盖在吸附剂表面。 3、为了保持柱子的均一性，使整个吸附剂浸泡在溶剂或溶液中是必要的。否则当柱中溶剂或溶液流干时，就会使柱身干裂，影响渗滤和显色的效果。 4、最好用移液管将欲分离溶液转移至柱中。 姓名: 徐静 班级：制药111班 5801311021 日期：2012/11/19