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细胞生物学实验-本科 周次实验名称课时数（共9）8实验一 细胞形态的观察及显微镜的使用310实验二 线粒体的超活染色与观察312实验三 细胞骨架的染色与观察3 实验一 细胞形态的观察及显微镜的使用 一、目的和要求 1．练习和巩固使用显微镜的基本方法 2．了解细胞的基本形态和结构 3．学习生物绘图法 二、仪器设备 1．普通光学显微镜（每人一台）。 2．同学用制片：平滑肌细胞永久制片 人精子永久制片 猫脊髓横切永久制片 卵巢切片永久制片 三、实验内容 1．平滑肌细胞 平滑基细胞切片表本地背景下观察，可以看到许多被染成粉色的平滑肌纤维，平滑肌纤维是梭型的细胞，细胞界限不明显，被染成兰紫色的椭圆形的细胞核位于细胞的中央，找一处切的比较薄而染色均匀的部位换高倍镜仔细观察。注意平滑肌纤维的横切面与纵切面的区别。 2．人精子细胞 取人精子涂片标本置于低倍镜下进行观察，找出目标后，换用高倍镜观察，可以见到椭圆形的精子细胞的头部和细长的尾部。醋酸洋红染色，头部和尾部均呈粉红色。 3．神经细胞 取猫脊髓横切制片，先用肉眼观察，分出灰质和白质，而后放在低倍镜下观察，在灰质中有许多被染成棕黄色的多极神经元（HE染色的片子中多级神经元被染成紫红色）。细胞形状各异，细胞核一般为球形，染色较浅，核仁清晰（在HE染色时核染色极淡，和人明显，被染成兰紫色）。低倍镜下观察后换高倍镜仔细观察。 4．卵细胞 卵巢是产生卵和分泌性激素的器官。卵巢表面覆有单层扁平或立方细胞构成的表皮上皮，上皮下方位致密结缔组织组成的白膜。卵巢分为外周的皮质和中央的髓质，两者界限不明显。髓质狭小，为疏松结缔组织，其中有较多的弹性纤维和较大的血管。皮质较厚，含有不同发育阶段的卵泡，卵泡间富有梭形细胞和网状纤维，胶原纤维较少。卵泡是由卵细胞和围绕卵细胞的卵泡细胞组成。卵泡生长发育过程中，其结构发生一系列变化。一般可分四个时期： ① 原始卵泡：位于皮质浅部，数量多。由中央一个初级卵母细胞及包围它的单层扁平卵泡细胞组成，初级卵母细胞较大，核大而园，呈空泡状，核仁大而明显。 ② 初级卵泡：有一个位于中央的初级卵母细胞和周围的单层或多层的卵泡细胞组成。初级卵母细胞已经逐渐变大，卵泡细胞表面的基膜明显，在卵泡细胞和初级卵母细胞之间出现一较厚的富含糖蛋白的酸性膜，称为透明带。 ③ 次级卵泡：当卵泡细胞增厚至6-12层时，细胞间出现一些腔隙，随着卵泡的发育增大，小腔逐渐合并成一个较大的卵泡腔，腔内充满卵泡液。由于卵泡液增多和卵泡腔的扩大，将初级卵母细胞与周围的一些卵泡细胞挤至卵泡的一侧，形成一个突入卵泡腔的隆起，为卵丘。此时的初级卵母细胞体积更大，紧靠卵细胞的一层卵泡细胞也长大成柱状，并整齐地排列成放射状，称放射冠。这种具有一个大卵泡腔的次级卵泡，又称囊状卵泡。 ④ 成熟卵泡：囊状卵泡急需增大，并向卵巢表面突出，为成熟卵泡，成熟卵泡腔大，卵泡细胞停止增殖。 四、作业与思考题 1、绘出平滑肌细胞、神经细胞的显微图？ 2、显微镜使用过程中需要注意哪些问题？ 实验二 线粒体的超活染色与观察 一、实验目的 1. 观察动、植物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。 2. 学习一些细胞器的超活染色技术。 二、实验原理 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织某些结构能着色但又不影响细胞的生命活动和产生任何物理化学变化以致引起细胞的死亡的一种染色方法。因此活染技术通常可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。詹纳斯绿B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。 三、实验用品 （一）材料 人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞 （二）器材 显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。 （三）试剂 1．Ringer 溶液 氯化钠 0.85g 氯化钾 0.25g 氯化钙 0.03g 蒸馏水