克隆基因的诱变.ppt

克隆基因的诱变;1、缺失诱变：用可从凹进的3’端沿3’到5’端方向移去一条链的外切核酸酶进行单向缺失，再用一种单链特异性异性核酸酶制成平末端用于连接，经转化产生具缺失的克隆。 2、定点诱变：在一个特定位点改变一个或几个核苷酸通常需要将诱变引物与模板退火，再用DNA聚合酶合成互补链。 3、PCR诱变：用正向与反向突变的引物及可结合常用载体序列的另一对引物，进行两组PCR反应来分别扩增待突变的DNA的5’与3’部分。然后将这两组PCR产物混合，并进行只用外部引物的另一PCR。这些产物中部分再通过亚克隆代替最初步分子中要突变的区域;缺失诱变 S1核酸酶 ：来源于稻谷曲霉(Aspergillusoryzae)，是一种高度单链特异的核酸内切酶，在最适的酶催反应条件下，降解单链DNA或RNA，产生带5，-磷酸的单核苷酸或寡核苷酸。 S1核酸酶的单链水解功能可以作用于双链核酸分子的单链区，并从单链部位切断核酸分子，而且这种单链区可以小到只有一个碱基对的程度。由于具备这种功能，使S1核酸酶在分析核酸杂交分子(RNA-DNA)的结构、给RNA分子定位、测定真核基因中间隔子序列的位置、去除DNA片段中突出的单链尾，以及打开在双链cDNA合成期间形成的发夹环。 绿豆核酸酶 ：来源于绿豆芽的核酸酶。将单链DNA降解为5′端带磷酸基团的单核苷酸或寡核苷酸。双链DNA、双链RNA及DNA与RNa杂交体对此酶相对不敏感。但此酶大量时也能将双链核酸完全降解。其物理性质及催化性质与S1核酸酶相似，但绿豆核酸酶的作用比S1酶更温和。用于使DNA突出端变为平端。 BAL 31 的主要活性为3“外切核酸酶活性。它可从线状DNA两条链的3”端去除单核苷酸。BAL 31还是一个内切核酸酶，因此利用其3“外切酶活性连续去除3”端单核苷酸后形成的单链DNA，可被BAL 31的内切酶活性所降解。 ;缺失诱变;定点诱变;;;