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溶菌酶研究现状 2010级基地班 马冬珂关键词：溶菌酶 基本性质 活性检测 酶学性质 提取，分离，纯化 纯度检测 一：溶菌酶的基本性质： １９０７年，Ｎｉｃｏｌｌｅ最早发表了枯草杆菌溶菌因子的报告，两年后，Ｌａｓｃｈｔｓｃｈｅｎｋｏ指出，鸡蛋也有较强溶菌活性，并把它命名为溶菌酶（Ｌｙｓｏｚｙｍｅ，ＥＣ３．２．１．１７）。紧接着Ｆｌｅｍｉｎｇ和Ｍｅｙｅｒ等证实植物中也含有溶菌酶，以后人们对溶菌酶的特性有了更深入的认识。【1】 作用机制： 溶菌酶是一种广泛存在于各种动植物有机物中的糖苷水解酶，作用于Ｎ一乙酰氨基葡萄糖和Ｎ一乙酰胞壁之间的β—１，４糖苷键，能使某些细菌细胞壁中的粘多糖成分分解，破坏肽聚糖支架，在内部渗透压的作用下，细胞胀裂，细菌裂解，而人和动物细胞无细胞壁结构，也无肽聚糖，故溶菌酶对人体细胞无毒性作用，但具有溶解细胞壁的能力。【2】 溶菌酶分子量的测定： 溶菌酶原料相对分子质量测定采用ＳＤＳ ＰＡＧＥ凝胶电泳法测定，分离胶浓度为１２％，采用考马斯亮蓝染色。 溶菌酶是由１２９个氨基酸残基组成的碱性球蛋白，等电点在ｐＨ值１０．８左右，分子量为１４０００，化学性质非常稳定。当ｐＨ值在１．２　—１１．３的范围剧烈变化时，其结构几乎不变。在酸性环境下，溶菌酶对热的稳定性很强；ｐＨ值低于４时，溶菌酶可以长期在室温下存放。其纯品为白色或微黄、黄色的结晶体或无定型粉末，无异味，，微甜，易溶于水，遇碱易被破坏，不溶于乙醚. 280nm的消光系数为13.0。酶活性可被该酶活性可被一些金属离子Cu2+，Fe2+，Zn2+（10-5～10-3M）以及N-乙酰葡萄糖胺所抑制，能被Mg2+,Ca2+（10-5～10-3M）、NaCl所激活。 应用： 在国外，溶菌酶普遍的应用在食品的杀菌，保险，防腐以及微生物发酵和生物工程技术中菌体内容物的提取，如核酸，蛋白质，抗生素，酶等的提取，在医药和临床上，溶菌酶制成的各种药物具有抗菌抗病毒，消炎消肿，增强抗生素疗效等作用，检测血清尿中的酶的活性，临床上可用于诊断白血病。【13】 溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合，与DNA、RNA、脱???基蛋白形成复盐，使病毒失活。因此，该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。【10】 由于溶菌酶能破坏革兰氏阳性菌的细胞壁而具有杀菌能力。因此在医学临床上是有效的消炎剂。可用于阻止流感、清除坏死组织等;另外,若将溶菌酶加在鲜牛奶或奶粉中,可增强婴儿的免疫力;作为防腐剂加入到饮料、糕点和肉制品中,可延长商品的货架期。另外,在基因工程和细胞工程上,也大量使用溶菌酶以制造和提取菌体内活性物质。【14】 前景： 溶菌酶有广阔的应用前景。提取溶菌酶，是一项生产简单、投资少、见效快的开发项目，有巨大的经济价值。溶菌酶在医学和酶工程上的应用正方兴未艾。当前，溶菌酶的研究和应用尚处于起步阶段，还存在很多的问题。可以预见，溶菌酶将发挥越来越大的作用。 二：溶菌酶的活性检测： （1）酶活力测定方法： 由于原材料不同,提取方法不同,应用时底物条件(如pH、温度等)的差异性往往影响溶菌酶的活力,因此在制取和应用溶菌酶的过程中随时要测定其活力。目前测定溶菌酶活力的方法主要是采用溶壁微球菌作底物,通过酶作用前后吸光度的变化来表示。方法繁琐,常常要先培养菌体,给测定带来许多不便,限制了它的使用。用壳聚糖代替细菌作底物,免去细菌培养过程,简便了测定程序。由于溶菌酶可以内切的方式作用于壳聚糖,断开糖链上的β-1,4糖苷键。因此,通过测定溶液中的还原糖浓度,可间接求出溶菌酶活力及酶反应速度。【8】 酶活力的测定采取溶菌酶能水解溶壁微球菌，使得底物悬浮液的浊度（可用450nm波长下的吸光度来衡量）下降，故可用反应液在450nm波长下吸光度下降的速度来表示酶活性的经典方法。然后计算酶活力的单位： 酶的活力单位数=△A450nm/t×0.001 比活力=酶的活力单位数/mg蛋白质 蛋白含量的测定用考马斯亮蓝G-250法分析溶液中可溶性蛋白的含量。取50uL的样品液加进2.5mL的考马斯亮蓝G-250溶液，摇匀，放置5min后，在595nm波长下测定吸光度，并根据标准曲线计算出蛋白含量。（由标准曲线求得的回回方程为：酶样蛋白含量：b(mg/mL)=1.674×A595nm-0.0354 另外，终点法，动力法，紫外可见分光光度法，荧光分光光度法，酶偶联法，电化学法也可以测定酶活力。 （2）酶活力单位定义： 酶活力的度量单位。1961年国际酶学会议规定：1个酶活力单位是指在特定条件（25℃，其它为最适条件）下，在1分钟内能转化1微摩尔底物的酶量，或是转化底物中1微摩尔的有关基团的酶量。 　　酶活力单位：用来表示酶活力大小的单位，通常用酶量来表示。 　　其中一个称酶活力国际单位，规定为：在特