第二章分子克隆工具酶重点.ppt

第二章 分子克隆工具酶; 基因工程的操作，是在分子水平上的操作，是依赖一些酶(如限制性核酸内切酶，连接酶，DNA聚合酶等)作为工具对基因进行人工切割，拼接和扩增等操作。所以把这些酶称之为“工具酶”。 工具酶是对野生菌株（或真核生物如酵母）进行改造、优化、而产生的生物工程产品。;工具酶;酶;1 限制性内切酶;核酸酶（Nuclease）： 通过切割相邻两个核苷酸残基之间磷酸二酯键，导致核酸分子多核苷酸链水解断裂的蛋白酶。 1）按作用对象可分为: Deoxyribonuclease (DNAase) Ribonuclease (RNAase) 2）按水解断裂核酸分子不同方式可分为： Endonuclease Exonuclease;限制性内切核酸酶（restriction endonuclease): 指一类能识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，并在识别序列内或附近特异切割双链DNA的核酸内切酶。;1.2 限制性核酸内切酶的命名;1.3 限制性核酸内切酶的分类;1.3.1 Ⅰ型限制性内切酶;1.3.2 Ⅲ型限制性内切酶;1.3.3 Ⅱ型限制性内切酶;(1) 基本特性;Enzyme;(2)同裂酶（isoschizomer） ;② 同序异切酶? ? KpnⅠ 和 Acc65Ⅰ 识别的序列是相同的，但它们的切割位点不同，分别为 GGTAC↓C