第七章化学酶工程-人工模拟酶分析.pptVIP

2、分子印迹酶 选择的印迹分子有： 印迹底物、产物、底物类似物： 印迹过渡态类似物： 表面印迹过渡态类似物： 通过分子印迹技术，印迹后的聚合物除了可产生底物的结合部位之外，重要的是在结合部位的空腔内诱导产生与底物定向排列的催化基团，从而表现出酶的性质。 性质：遵循米氏方程。 在某些载体表面产生分子印记空腔或进行表面修饰产生印记结合部位的过程。 表面分子印迹 分子印迹酶催化效率低的主要原因： 底物分子在大块的印迹聚合物中扩散很慢，从而降低酶活性。 蛋白质表面印迹—在聚合物硅石的涂层上的示意图 影响分子印记酶选择性识别的因素 底物结构和印记分子的一致性； 聚合物与印记分子之间的作用力； 交联剂的类型和用量：一般80%以上交联度。 聚合条件 ① 固相萃取 通常样品的制备都包括溶剂萃取，由于分子印迹技术的出现，可利用分子印迹聚合物选择性富集目标分析物。 印迹聚合物既可在有机溶剂中使用，又可在水溶液中使用，与其他萃取过程相比，具有独特的优点。 应用： 印迹分子在一定程度上可和抗原相一致； 因而可用于抗体模拟； 这种模拟抗体制备简单、成本低，在高温、酸碱及有机溶剂中具有较好的稳定性，此外还可以重复使用。 ② 天然杭体模拟 分子印迹聚合物是高交联聚合物，结构过于刚性，缺乏酶的柔性，催化效率不高； 单体与模板之间形成的次级作用力小，导致聚合物对反应底物的识别能力受到限制。 分子印记酶的局限性 2. 生物印迹酶 1．生物印迹：主体分子是生物分子，以天然的生物材料（蛋白质、糖类）为骨架，在其上进行印迹而产生对印迹分子具有特异性识别空腔的过程。 天然生物材料如蛋白质，含有丰富的氨基酸残基，它们与印记分子能产生很好的识别作用。 2．有机相生物印迹酶 生物印记酶的原理：酶蛋白分子在有机相中具有对配体的“记忆”功能。 印迹分子与蛋白质在水溶液中结合之后，冷冻干燥，除去印迹分子，然后置于有机相中，因在有机相中，生物分子构象的柔性被取消，保持了生物分子构象的高度刚性。 在有机介质中酶的构象即被固定。 生物大分子在有机溶剂中柔性丧失，刚性增强，与底物结合 的活性构象被固定。 制备生物印迹酶的过程： 使生物分子部分变性，扰乱其天然构象； 加入印迹分子，使印迹分子与部分变性的生物分子充分结合； 用交联剂交联印迹的生物分子； 用透析除去印迹分子。 生物大分子作为被印记的宿主，印记酶的活性中心更接近于天然酶，催化效率高。 宿主与印记分子之间形成的次级作用力大，增强了印记酶对底物的识别力。 生物印记酶的优势： 1. 简单模拟向高级模拟发展； 2. 开发更多可多部位结合且多重识别功能的模拟酶； 3. 人工模拟酶可代替天然酶； 4. 人工酶在分析、医药、工业上的应用。 7.2.5 人工酶的研究进展 作业O(∩_∩)O 酶分子化学修饰的基本原理？ β-巯基乙醇、二硫苏糖醇对酶分子二硫键的化学修饰过程； 简述蛋白质类修饰酶分子的优点是什么以及活性酯法活化白蛋白修饰酶的反应过程； 什么是分子印迹技术？简述制备分子印迹聚合物的过程。 酒石酸作用于牛血清白蛋白 冷冻干燥，利用有机溶剂除去酒石酸 得到酒石酸印迹的牛血清白蛋白 冠醚环为结合部位，含醚侧臂或亚甲基为立体识别部位，末端的巯基为催化部位。 * 杯芳烃的衍生化反应，不仅在杯芳烃下缘的酚羟基、上缘的苯环对位，而且连接苯环单元的亚甲基都能进行各种选择性功能化，这不仅能改善杯芳烃自身水溶性差的不足，而且还可以改善其分子络合能力和模拟酶活力； * 这样的结合部位对模板分子可产生多重相互作用，因而对此印记分子具有特异性结合能力。 * 印迹分子的强度与选择性在一定程度上可和抗原与抗体之间的作用相媲美； * 生物印迹是分子印迹的一种形式，只不过主体分子是生物分子而不是聚合物， * 生物分子保持了印迹产生的结合部位，可对印迹分子产生很好的识别作用。 * 起始的生物分子可以是无酶活性的蛋白质，也可以是具有催化活力的酶，印迹分子是酶的底物类似物、抑制剂、过渡态类似物。 * 简单模拟：模拟物只含有与生物活性酶相同的因子。 模拟酶活性中心结构：空腔的大环化合物作为底物识别部位，在边缘衍生催化基团。 整体模拟：高级模拟，需要考虑识别和催化部位的协同性。 * 第七章 化学酶工程 模拟酶的概念及理论基础 模拟酶的分类 印迹酶 7.2 酶的模拟 模拟酶的概念及理论基础 模拟酶的分类 分子印记酶的定义及影响分子印记酶选择性识别的因素 生物印记酶的原理 本节重点 7.2.1 模拟酶的概念 人工（模拟）酶：根据酶的催化原理，模拟酶的生物催化功能，用有机化学和生物学的方法合成具有专一催化功能的物质。 是在分子水平上模拟天然酶活性部位的结构特征（包括：形状、大小及其微环境），以及天然酶