第三章基因工程制药分析.ppt

第三章 基因工程制药 第一节、 基因工程制药概述 第二节、基因工程制药基本技术与策略 第三 节、基因工程制药生产的基本步骤 第四节、 基因工程制药的具体实例 第一节 基因工程制药概述 一、基因工程制药的概念 二、基因工程技术所生产的药物 三、基因工程制药的优点 四、基因工程制药所使用的生物技术 五、我国基因工程制药的进展 六、基因工程制药生产的基本步骤 七、基因工程制药生产的化学工艺学要求 八、基因工程的发展 一、基因工程制药 是指在体外通过重组DNA技术，对生物的遗传基因进行剪切、拼接、重新组合，与适宜的载体连接，构成完整的基因表达系统，然后导入宿主生物细胞内，与原有遗传物质整合或以质粒形式单独在细胞中繁殖，并表达活性蛋白质、多肽或核酸等药物的工艺过程。 二、基因工程技术所生产的药物 主要是药用活性蛋白质和多肽类，具体包括： （1）免疫蛋白质各种抗原、单克隆抗体、乙肝疫苗。 （2）细胞因子各种干扰素、白细胞介素、集落刺激生长因子、表皮生长因子、凝血因子、促红细胞生成素。 （3）激素胰岛素、生长激素、心钠素、人脑激素、人松驰激素。 （4）酶类尿激酶、链激酶、葡聚糖酶、组织型纤维蛋白溶解酶原激活剂、超氧化物歧化酶、α-淀粉酶、凝乳酶、人溶菌酶、胰蛋白酶抑制剂。 三、基因工程制药的优点 （1）可以生产出过去难以获得的生理活性蛋白和多肽。 （2）可以通过大批量的生产方法获得足够数量的生物活性物质。 （3）可以发掘出更多的内源性生理活性物质。 （4）利用基因工程技术和蛋白质工程技术可以对药物蛋白进行修饰和改造，来提高药效价值，或者获得新型的化合物。 （5）为制药工业提供新技术，为新药研发提供了新途径和新技术，提高药物研发的速度 四、基因工程制药所使用的生物技术 （1）DNA重组技术 （2）淋巴细胞杂交瘤技术 （3）细胞培养技术 （4）克隆表达技术 基因工程制药的基本技术 （1）根据DNA分子复制与稳定遗传的原理，利用载体DNA在受体细胞中独立于染色体DNA而自主复制的特性，将外源基因与载体分子重组，通过载体分子的扩增提高外源基因在受体细胞中的剂量，借此提高其宏观表达水平。 （2）根据基因表达的分子生物学原理，筛选、修饰和重组启动子、增强子、操纵子、终止子等基因的转录调控元件，并将这些元件与外源基因精细拼接，通过强化外源基因的转录提高其表达水平 基因工程制药的基本技术 （3）根据分子生物学原理，选择、修饰和重组核糖体结合位点及密码子等mRNA的翻译调控元件，强化受体细胞中蛋白质的合成过程。 （4）根据生化工程学原理，从基因工程菌（细胞）大规模培养的工程和工艺角度切入，合理调控其增值速度和最终数量，这也是提高外源基因表达产物产量的主要环节。 五、我国基因工程制药的进展 α-1b型基因工程干扰素，是我国自行研究开发的具有国际先进水平的基因工程药物，于1997年通过III期临床，并获得国家一类新药证书。它源于中国人基因，最适于黄种人使用。 六、基因工程制药生产的基本步骤 1、流程图 2、上游阶段 3、下游阶段 1、流程图 获得目的基因↓构建重组质粒↓组建基因工程菌或者基因工程细胞↓培养工程菌↓产物分离纯化↓除菌过滤↓半成品检定↓成品检定↓包装 2、上游阶段 主要是分离目的基因和构建工程菌细胞，其工作主要是在实验室内完成。具体内容包括： （1）获得目的基因 （2）构建基因克隆载体和基因表达载体 （3）将重组后的基因转移到大肠杆菌或者其它宿主细胞内 3、下游阶段 是指从工程菌的大规模培养，一直到产品的分离纯化，其工作主要是将实验室成果产业化、商品化。其工作重点是： （1）必须保证所表达的蛋白质具有生物活性 （2）考虑基因工程蛋白质表达量的多少 （3）蛋白质分离纯化的难易程度 七、基因工程制药生产的化学工艺学要求 （1）工程菌大规模发酵工艺最佳参数的确立 （2）新型生物反应器的研制 （3）高效分离介质和装置的开发 （4）分离纯化技术的优化控制 （5）高纯度产品的制备技术 （6）生物传感器等仪器仪表的设计和制造 （7）电子计算机的智能优化控制 八、基因工程的发展 （一）基因工程的历史 （二）基因工程所生产的产品 （三）基因工程的发展方向 （一）基因工程的历史 1973年Cohen第一例成功的克隆实验。 1978年Genentech公司生产出世界上第一种基因工程蛋白药物人胰岛素。 1982年第一个基因工程药物重组人胰岛素在英、美获准使用。 八十年代中期 PCR技术发明 1985年第一批转基因家畜（兔、猪和羊）培育成功。 1999年9月中国获准加入人类基因组计划，负责测定人类基因组全部序列的1% 2000年6月26日科学家公布人类基