仪器分析讲稿(第3章液相)-3.ppt

采取措施： 1）液-液分配色谱：薄的固定相层；吸附、排阻、离子交换色谱：小的颗粒填料。 2）采用扩散系数大的液相固定相。 3）减小流动相的流速，改善传质。 4.应用：解决了以往难分离混合物的分离问题. 如酸、碱和离子、非离子的混合物，特别是一些生化试样如核酸、核苷、儿茶酚胺、生物碱及药物的分离了。 还可借助离子对的生成给试样引入紫外吸收或发荧光的基团，提高检测的灵敏度。 Step 2: Mobile Phase Evaporation? Droplets pass through a heated zone ? Mobile phase evaporates from the sample particle? Dried sample particles remain Step 3: Detection? Sample particles pass through an optical cell? Sample particles interrupt laser beam and  scatter light? Photodiode detects the scattered light  §3.7高效液相色谱分离类型的选择90/ 1.应考虑的因素： a.试样的性质:分子质量,化学结构极性,溶解度参数； b.色谱分离类型的特点及应用范围； c.实验室条件：仪器、色谱柱等. 2.应用范围 a.以分子量划分 1）低分子量，挥发性高的试样—用GC； 2）分子量200—2000的试样—标准LC； 3）分子量大于2000—空间排阻色谱法； b.以试样在溶剂中溶解情况划分 3.汇总（table3—3） 色谱分离方法的选择:表3-3 §3.8高效液相色谱法应用实例 HPLC更适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、生理活性以及相对分子质量较大的物质； 因而已应用于核酸、肽类、内酯、稠环芳烃、高聚物、药物、人体代谢产物、生物大分子、表面活性剂、抗氧剂、杀虫剂、除莠剂等分析中； 在化工、环保、临床药物等领域广泛应用； 目前在生命科学中又显示出其突出地位. 具体认真观察、分析P91—97各图. §3.9 液相制备色谱97/ 1. 作用：制备色谱是以色谱技术来分离、制备较大量纯组分的有效方法。 2.实现液相制备色谱主要问题： a.色谱柱的柱容量 b.液相制备色谱方法 c.液相制备色谱仪 §3.10毛细管电泳 1.定义：在外加电场的影响下，带电的胶体粒子或离子在分散介质中作定向移动的现象称为电泳。 2.分类： a.毛细管区带电泳； b.毛细管凝胶电泳； c.胶束电动力学毛细管色谱； d.毛细管等电聚焦； e.毛细管等速电泳； f.毛细管电渗色谱. 本章作业：思考3,5，6,8题. 本章学习结束. 第三章思考题解答 1.从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相色谱及液相色谱的异同点。 解：二者都是根据样品组分与流动相和固定相相互作用力的差别进行分离的。 从仪器构造上看，液相色谱需要增加高压泵以提高流动相的流动速度，克服阻力。同时液相色谱所采用的固定相种类要比气相色谱丰富的多，分离方式也比较多样。气相色谱的检测器主要采用热导检测器、氢焰检测器和火焰光度检测器等。而液相色谱则多使用紫外检测器、荧光检测器及电化学检测器等。但是二者均可与MS等联用。 二者均具分离能力高、灵敏度高、分析速度快，操作方便等优点，但沸点太高的物质或热稳定性差的物质难以用气相色谱进行分析。而只要试样能够制成溶液，既可用于HPLC分析，而不受沸点高、热稳定性差、相对分子量大的限制。 2.液相色谱中影响色谱峰展宽的因素有哪些? 与气相色谱相比较, 有哪些主要不同之处? 解:液相色谱中引起色谱峰扩展的主要因素为涡流扩散、流动的流动相传质、滞留的流动相传质以及柱外效应。 在气相色谱中径向扩散往往比较显著，而液相色谱中径向扩散的影响较弱，往往可以忽略。另外，在液相色谱中还存在比较显著的滞留流动相传质及柱外效应。 3. 在液相色谱中, 提高柱效的途径有哪些?其中最有效的途径是什么? 解:液相色谱中提高柱效的途径主要有: 1.提高柱内填料装填的均匀性; 2.改进固定相 减小粒度; 选择薄壳形担体; 选用低粘度的流动相; 适当提高柱温 其中,减小粒度是最有效的途径. 4. 液相色谱有几种类型?它们的保留机理是什么? 在这些类型的应用中,最适宜分离的物质是什么? 解:液相色谱有以下几种类型:液-液分配色谱; 液-固吸附色谱; 化学键合色谱;离子交换色谱; 离子对色谱; 空间排阻色谱等. 液-固吸附色谱是通过组分在两相间的多次吸附与解吸平衡实现分离的.最