第四章第二节分光光度计的操作与使用.pptVIP

可见分光光度法 一、显色反应及显色条件的选择 1.显色反应 将试样中被测组分转化成有色化合物的反应。 参比溶液的选择一般遵循以下原则： 1.当光从一种介质传播到另一种介质中时，下列（ ）保持不变。 2.光的粒子性表现在下述（ ）性质上。 3. 下列（ ）光谱属于分子吸收光谱。 4. 紫外-可见光谱的产生是由于分子在吸收紫外-可见光后，发生（ ）类型的跃迁。 问答题 1．朗伯-比耳定律的物理意义是什么？写出其数学表达式。 2．什么是吸收曲线？什么是标准曲线？它们有何实际意义？ 3．显色反应如何选择？ 4．吸光度测量条件如何选择？ 5．光度分析法中，参比溶液应如何选择？ 答案 紫外-可见分光光度法的应用 吸光系数 吸光系数k的物理意义为：液层厚度为1cm的单位浓度溶液的吸光度，它表示物质对特定波长光的吸收能力。一个物质在一定条件下的吸光系数为定值。通常有两种表示方法： （一）摩尔吸光系数ε 物理意义是指样品浓度为1mol·L-1的溶液置于1cm样品池中，在一定波长下测得的吸光度值。量纲为L·mol-1·cm-1 。 （二）吸光系数a 物理意义是指溶液浓度在1g/L，液层厚度为1cm时，在一定波长下的吸光度值。量纲为L·g-1·cm-1。 吸光系数和摩尔吸光系数有如下关系： （三）、吸光系数 例4-1 用氯霉素（分子量为323.15）纯品配制100 mL含2.00 mg的溶液，使用1.00 cm的吸收池，在波长为278nm处测得其透射率为24.3%，试计算氯霉素在278 nm波长处的摩尔吸光系数和比吸光系数。 解：已知 λ=278nm M=323.15g/mol c=2.00×10-2 T=24.3% (四)、吸收光谱 （五）、吸收光谱 一、定性分析 1.光谱对照 同样条件下测定待测物和标准物的吸收光谱，如果两者吸收光谱一样，可认为是同一物质。 如无标准物，也可比较标准谱图集里的光谱。 一、定性分析 2.特征数据比较 最大吸收波长λmax和吸光系数，是用于定性鉴别的主要光谱数据。 3.吸光度比值的比较 有些物质的光谱上有几个吸收峰，可在不同的吸收峰（谷）处测得吸光度的比值作为鉴别的依据。 二、定量分析 定量分析的依据是 1. 单一组分的测定 （1）吸光系数法 查得吸光系数后根据吸光度求得样品浓度 二、定量分析 例4-5 已知维生素B12在361nm处的吸光系数为20.7。精密称取样品30.0 mg，加水溶解后稀释至1000 mL，在该波长处用1.00 cm吸收池测定溶液的吸光度为0.618，计算样品溶液中维生素B12的质量分数。 解：已知 A =0.618 a =20.7 l =1.00cm 由A =alc 样品中维生素B12含量为 二、定量分析 1. 单一组分的测定 （2）标准比对法 相同条件下，分别配制待测溶液X和标准溶液S，并分别测定吸光度。根据郎伯-比尔定律，可写出 二、定量分析 例4-6 为测定维生素B12原料药含量，准确称取试样25.0mg，用蒸馏水溶解后，定量转移至1000ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度后，摇匀。另称取同样重量的B12标准品，用蒸馏水溶解后，稀释至1000ml，摇匀。在361nm波长处，用1cm比色皿分别测得样品溶液和标准品溶液的吸光度分别为0.512和0.518。求试样中B12的百分含量。 解：已知 Ax =0.512 As =0.518 两溶液配制、稀释方法一致 二、定量分析 1. 单一组分的测定 （3）标准曲线法 用标准曲线法测铁的浓度为例： ①配一系列浓度的标准铁溶液，依次测定吸光度 ②作c-A图，即标准曲线 二、定量分析 2. 多组分的测定 当溶液内有两个及以上组分并需测得各自含量时，就是多组分的测定。 二、定量分析 2. 多组分的测定 （1）吸收光谱互不重叠 此种情况下可以按单组分测定的方法分别求得各个组分浓度 二、定量分析 2. 多组分的测定 （2）吸收光谱部分重叠 例如右图，可先在无干扰处λ2求得a的浓度，再求得b的浓度 依次求得a和b的浓度 二、定量分析 2. 多组分的测定 （3）吸收光谱相互重叠 解方程组法,如右图 二、定量分析 2. 多组分的测定 （3）吸收光谱相互重叠 等吸收双波长消去法 例如右图，选取两个波长，a物质在这两波