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III 水凝胶对骨髓间充质干细胞在皮肤移植模型和心肌梗死模型中滞留率的影响 中文摘要 水凝胶对骨髓间充质干细胞在皮肤移植模型和心肌梗死 模型中滞留率的影响 中文摘要 第一部分：骨髓间充质干细胞联合水凝胶对同种异体皮肤移植的作用 的：联合水凝胶探讨骨髓间充质干细胞对移植皮肤的作用。 方法：（1）人骨髓间充质干细胞 bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）的 培养和鉴定，并经CM-DiL 染色进行标记。（2）选用雄性的C57BL/6 小鼠作为皮肤移 植的供体，雄性ICR 小鼠作为皮肤移植的受体建立同种异体皮肤移植的动物模型 3 术后将ICR 小鼠（受体）随机分为4 组，每组10 只，分别给予以下处理：在空白组 中，单纯给予300ul PBS 皮下注射；在水凝胶处 组中，单纯给予300ul 水凝胶皮下 注射；在细胞处 组中，单纯给予受体人BMSCs 溶液300ul 移植皮下注射；在联合处 组中，给予受体水凝胶和BMSCs 的300ul 混合液皮下注射。（4）观察受体移植皮片 的存活状况, 在术后第9 天制作移植皮片的冰冻切片，经荧光显微镜观察体内细胞存 活数量：术后开始观察移植皮片的存活时间和状况；开始同时观察的皮片中骨髓间充 质干细胞的存活数量 （5）人骨髓间充质干细胞在受体ICR 鼠的体内分布情况检测： 术后第5、9、14 天将受体的心、肝、脾、肺、肾等主要脏器制作成冰冻切片，观察 间充质干细胞的迁移数量。（6）受体ICR 小鼠外周血中炎症因子的测定：术后第 14 天取外周血，应用ELISA 检测外周血中，炎症因子IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF- α 的含量。 结果：（1）人BMSCs 呈贴壁克隆样生长，流式细胞仪显示P3 代的MSCs 阳性表达CD29 （细胞整合素分子，94.86%）、CD90 （Thr-1 分子，94.06%）、CD73 （89.64%）、CD105 （94.98%）和CD44 （粘附分子,99.2%）；但低表达造血干细胞表面标志CD34 （0.84%）， CD11B （1.43%）、CD31 （10.86%）、CD45 （1.28%）。证明本实验运用全骨髓差异贴壁法 培养的细胞 异表达MSC 的表面抗原。 2 移植术后观察受体皮肤存活的情况：各组1-4d 没有明显变化。在空白组中，第 I 中文摘要 水凝胶对骨髓间充质干细胞在皮肤移植模型和心肌梗死模型中滞留率的影响 5d 出现局部皮肤变黑，8d 后皮肤结痂坏死；在水凝胶处 组中，第6d 可见局部皮肤 小溃疡，9d 后皮肤出现结痂坏死；在细胞处 组中，第8d 局部皮肤出现小溃疡，第 9d 局部皮肤变黑，11d 后皮肤发生结痂坏死；在联合处 组中，第 10d 出现局部皮肤 小溃疡，第 12d 出现局部皮肤变黑，13d 后皮肤发生结痂坏死。在细胞处 组和联合 处 组中，皮肤移植物的存活时间均比空白组长，具有统计学差异（P 0.05）；在水 凝胶处 组中，皮肤存活时间的比细胞处 组短，差异具有统计学意义 （P 0.05）； 联合处 组与空白组、细胞处 组和水凝胶处 组三组分别比较，皮肤移植物的存活 时间均延长，且差异具有统计学意义 （P 0.05）；联合处 组的皮片存活最长可达 18d。 （3）观察各组受体小鼠皮下人BMSCs 的滞留量：结果显示：在联合处 组中，受体 皮下组织中滞留的人BMSCs 最多。（4）观察受体体内的人BMSCs 的分布情况：结果 发现：皮下直接注射后9 天后，受体的肺脏组织内依然可以观察到荧光显示的核蓝染 胞质红染的骨髓间充质干细胞，心、肝、肾内观察不到上述荧光显示的骨髓间充质干 细胞，但是脾脏内在第5 天，可以观察到少量上述荧光显示的人骨髓间充质干细胞。 （5）ELISA 检测受体小鼠外周血细胞因子 IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF- α 的 检测结果： IL-2 浓度 pg/ml 各组分别为：1784.16±357.86、1013.62±25.71、 671.11±187.53 、482.47±33.13 ，空白组中，IL-2 的含量高于细胞处 组 （3739.59±493.21）异具有统计学意义 （P 0.05 ,在水凝胶处 组中，IL-2 的含量 明显高于细胞处 组和联合处 组（P 0.05 ; IL-4 浓度 pg/ml 各组分别为： 24.22±19.94、114.72±50.33、192.45±69.03、444.37±36.73，空白组中，IL-4 含量明显低于细胞处 组和联合处 组（P 0.05 ,在水凝胶处 组中，IL-4 的含量 明显低于细胞处 组和联合处