样本前期处理及HE染色-赵恒答案.pptVIP

固定 固定液的性质和条件 1、能迅速渗入组织，使组织细胞形态在短期内不至于有 较大变化 2、固定液有相当的渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定 3、使组织细胞不至于因固定而引起人为的改变 4、尽可能避免固定剂使组织膨胀或收缩 5、使组织达到一定硬度，获得较佳的折光率和对染料具 有较强的亲合力。 固定剂种类 单纯固定剂 ：10%甲醛、 4%多聚甲醛 、饱和的苦味酸溶 液 、冰醋酸 、锇酸 混合固定剂 ：Bouin氏固定液 、Zenker液（PH2.3）、 Carnoy液 、改良Bouin氏固定液 固定的目的 1、防止组织溶解及腐败，以保持组织和细胞与正常生活 时的形态相似 2、使细胞内蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变为不 溶性物质，以保持它原有的结构与生活时的相仿 3、组织细胞内的不同物质经固定后可以产生不同的折光 率，对染料也产生不同的亲和力，造成光学上的差异，使得在生活情况下原来看不清楚的结构变得清晰起 来，并使得细胞各部分容易着色，有利于区别不同的 组织成分 4、固定剂的硬化作用，增加组织硬度，便于制片 固定时应注意的事项 1、固定液及被固定的组织必须新鲜；固定液的用量一般为 组织体积的10~20倍 2、固定时间视组织块的种类、性质、大小，固定液的种类 性质、渗透力的强弱，固定时的温度的高低，实验目的 等来决定 3、防止被固定的组织因固定剂的作用而发生变形 4、固定所用的固定液，以新配的为好，放置过久会失效 5、在固定期间摇动组织或摇动容器有利于固定液的渗入， 对长期固定的标本，可经常更换固定液 6、固定时间太短，就会影响组织固定的效果时间太长，福尔马林会产生一种酸，影响核的染色 脱水透明 标本经二甲苯透明后，折射率改变，透明度提高，使得染 上色的部位更清晰地显示出来。 步骤 流水冲洗4h→ 70％乙醇2h → 80 ％乙醇过夜→ 90 ％乙醇 2h→无水乙醇Ⅰ1h →无水乙醇Ⅱ1h →二甲苯Ⅰ15min →二 甲苯Ⅱ15min 较常用的透明剂是二甲苯、甲苯、苯、氯仿等 1、二甲苯作用较快，透明力强，但组织块在其中停留过久， 容易收缩变脆变硬 2、甲苯的一般性质与二甲苯相似。用法亦同，唯沸点较低， 透明较慢，但不会使组织变脆 3、苯的用法同于二甲苯，对组织的收缩作用小，但须警惕其 爆炸和吸入而引起中毒。 4、氯仿适于大块组织的透明 注意事项 1、透明时间应由组织大小而定，—般各级停留时间在5min 至15min，在纯二甲苯中应更换2次，总时间则以不超过 1h为宜 2、材料经过透明，会显示出前一步脱水的效果如何，若脱 水彻底，组织则显现透明状态，如组织中有白色云雾状 说明脱水不净，须返工处理，但返工的效果往往不好 3、使用二甲苯透明时，应避免其挥发和吸收空气中的水分 并保持其无水状态 浸蜡包埋 1、组织经过脱水透明处理后浸蜡4h，然后进行包埋 2、浸蜡须在恒温箱中进行，恒温箱的温度调节至高于石 蜡熔点3度 切片可能产生的问题及解决方法 切片厚薄不匀 原 因： 1、切片机有毛病 2、夹刀不当，刀的倾角太大 3、未旋紧标本台螺旋 4、石蜡块过硬 解决办 法 1．矫正切片机装置 2．对症治疗 3．旋紧螺旋 4．将石蜡块在水中浸泡  材料发生裂隙破碎或脱落 原 因： 1、脱水不干净 2、有透明剂残留 3、石蜡透入时，温度过高或时间过长 4、由于脱水剂和透明剂的影响，使组织变硬发脆 5、材料太硬或太粗 补 救 办 法 ： 1、无法弥补 2、增加浸蜡时间，重新包埋 3、无法补救 4、用正丁醇、叔丁醇和二氧六环等进行脱水和透明 5、在蜡块表面涂一薄层火棉胶溶液  展片和捞片 1、直接展片法：在载玻片上滴加几滴蒸馏水，然后把切片 铺在小滴上面，用酒精灯在载玻片下面加热，待完全展 平，倾斜载玻片，倒弃多余水分，同时摆正切片。 2、温水漂浮法：用恒温水浴箱，先使水温保持在42℃，使