饲料中癸氧喹酯的测定高效液相色谱法.doc.docVIP

饲料中癸氧喹酯的测定　高效液相色谱法 1　范围 本标准规定了饲料中癸氧喹酯的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于我省配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中癸氧喹酯的测定。 2　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1　饲料　采样 GB/T 20195　动物饲料　试样的制备 3　原理 采用1%氯化钙甲醇溶液提取试样中的癸氧喹酯，高效液相色谱-荧光分光法测定，外标法定量。 4　试剂与材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T 6682一级水的规定。 4.1　氯化钙。 4.2　甲醇 色谱纯。 4.3　1%氯化钙甲醇溶液：称取10g氯化钙溶于1000mL甲醇中，混合均匀。 4.4　0.025mol/L氯化钙溶液：称取2.77g氯化钙，加水溶解，定容至1000mL。 4.5　癸氧喹酯标准品，纯度≥99.7%。 4.6　癸氧喹酯标准储备液：称取癸氧喹酯标准品20mg（精确到0.01mg）于100mL的容量瓶中，用1%氯化钙甲醇溶液溶解并定容至刻度，即为0.2mg/mL的癸氧喹酯标准储备液。4℃以下避光保存，有效期为3个月。 4.7　癸氧喹酯标准工作液：移取适量癸氧喹酯标准储备液，用1%氯化钙甲醇溶液稀释成浓度为0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL的癸氧喹酯标准工作液，现配现用。 4.8　微孔滤膜：0.22μm，有机膜。 5　仪器与设备 5.1　高效液相色谱仪：配有荧光检测器。 5.2　分析天平：感量 0.000 01g和 0.001g。 5.3　离心机：转速≥10000r/min，带有50mL离心管。 5.4　超声波清洗机。 6　采样与试样的制备 6.1　采样按GB/T 14699.1的规定执行。 6.2　试样制备按GB/T 20195的规定执行。 7　测定步骤 7.1　提取 称取试样2g（精确到0.001g）, 置于100mL具塞锥形瓶中, 准确加入50mlL1%氯化钙甲醇溶液，振摇2min, 超声提取15min，静置分层，取上清液于50mL离心管中10000r/min离心5min，取适量过微孔滤膜，待测。 7.2　测定 7.2.1　高效液相色谱参数 色谱柱：C18柱 250mm×4.6mm，5μm ，或相当者。 流动相：0.025mol/L氯化钙溶液+甲醇（V+V 15+85）。 流速：1.0mL/min。 进样量：20μL。 检测波长：激发波长326nm，发射波长384nm。 7.2.2　试样测定 取试样溶液和相应的标准工作液进样，以组分的保留时间定性，以色谱峰面积积分值做单点或多点校准，外标法定量。标准工作液和试样溶液中癸氧喹酯的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。癸氧喹酯高效液相色谱图参见附录A，癸氧喹酯标准工作液色谱图参见附录A中图A.1，饲料中添加癸氧喹酯标准物质色谱图参见附录A中图A.2。 7.2.3　空白试验 除不加试料外，采用上述相同步骤操作。 8　结果计算 试样中癸氧喹酯的含量由色谱数据处理软件或按下式计算获得： X——试样中癸氧喹酯的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； A——试样中癸氧喹酯的峰面积； Cs——标准工作液中癸氧喹酯的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； As——标准工作液中癸氧喹酯的峰面积； V——提取用溶液的总体积，单位为毫升（mL）； m——试样质量，单位为克（g）； f——稀释倍数。 计算结果需扣除空白试样，测定结果用两次平行测定的算术平均值表示，测定结果保留三位有效数字。 9　灵敏度、准确度、精密度 9.1　灵敏度 癸氧喹酯在饲料中的定量限为0.5mg/kg。 9.2　准确度 本方法癸氧喹酯在0.5mg/kg、1.0mg/kg、5.0mg/kg添加浓度水平上的回收率范围为（80～120）%。 9.3　精密度 本方法的批内变异系数≤10%，批间变异系数≤15%。 附录 图A.1　癸氧喹酯标准工作液色谱图（0.05μg/mL） 图A.2　饲料中添加癸氧喹酯标准物质色谱图（1.0mg/kg） DB43/T 890—2014 DB43/T 890—2014 2 1 癸氧喹酯 癸氧喹酯