（3.1-3.2植物细胞工程）.pptVIP

植物原生质体融合过程 3.2.7 人工种子 人工种子又称人造种子，这是细胞工程中最年轻的一项新兴技术。由英国科学家于1978年提出的。 天然种子，一般都是由种皮、胚乳和胚三部分构成。 人工种子是由体细胞胚、人工胚乳和人工种皮三个部分组成。 体细胞胚 胚不一定从受精卵发育来，尤其在植物界，往往可以看到未受精的卵细胞或胚囊细胞、珠心细胞等发育成胚的现象。 由体细胞发育成的类似于合子胚的结构成为胚状体或体细胞胚，简称体胚。 体胚具有两极性，可从方向相反的两端分化出茎和根。因此，体胚可以一次性再生成完整植株。 把体胚包埋在胶囊内形成球状结构，使其具备种子机能。所以，人工种子是一种人工制造的代替天然种子的颗粒体，可以直接播种于田间。 /kech/xbgc/md/picture/potato.JPG 马铃薯人工种子 * 包埋介质海藻酸钠 这种物质在0.1M氯化钙溶液中可以迅速固化成透明的小胶球。海藻酸价格低廉，质地柔软无毒性，还可人为地在其中加入各种营养物质和生长调节剂，因此是一种，迄今为止已发现的比较理想的体细胞胚包埋剂。 美国的一个研究组花了近两年时间，从百余种材料中筛选到目前广泛使用的人工种子包埋介质海藻酸钠。 三大难题有待克服 ①许多重要植物还不能培养出大量的高质量的体细胞胚。 ②现有的人工胚乳和种皮还不够理想，不能有效地防止微生物的腐蚀。 ③人工种子的贮藏有待进一步完善。 目前已制成模式性人工种子的植物十余种，但距离实际应用还有很大距离。 要点 外植体、愈伤组织、体细胞胚、人工种子 植物细胞培养的优点？ 植物组织（细胞）培养的基本过程？ 植物脱毒技术原理？ 植物原生质体如何制备？植物细胞融合的方法？ 植物细胞工程有何应用前景？ * 要求保持严格的无菌环境，以避免微生物和其他有害因素造成的不利影响。 * CO2培养箱是通过对周围环境条件的控制制造出一个能使细胞/组织更好地生长的环境，条件控制的结果就会形成一个稳定的条件：如恒定的酸碱度（pH值：7.2-7.4）、稳定的温度（37°C）、较高的相对湿度（95％）、稳定的CO2水平（5％）。CO2培养箱主要控制模拟活体内环境相关的3个基本变量：稳定的CO2水平、温度、相对湿度。 * 所谓细胞培养，就是将生物有机体的某一部分组织取出一小块，在体外经过表面消毒处理后，使其分散成单个游离的细胞，并放置在人工配制的培养基中进行培养，使之生长、分裂的技术。由于生物体的一种组织，往往包含有两种或两种以上的细胞（如叶片组织至少包括叶肉细胞、维管束鞘细胞和表皮细胞等），在培养过程中不易分开，所以细胞培养有时又叫组织培养，或统称为细胞与组织培养。 掌握细胞培养技术，为细胞生物学的研究提供了诸多的便利条件。首先，研究者可根据不同的研究内容和目的，十分方便地在细胞培养基中添加或减去某些特殊的物质，如激素或生长因子等，这样就可以确切地了解这些因子对细胞生长发育的效应及其生理生化本质。其次，可以获得比较均一的细胞群体，为细胞的生理生化分析以及不同细胞之间的相互作用的研究创造条件。事实上，近二十年来细胞生物学的一些重要理论研究的进展，例如细胞全能性的揭示，细胞周期及其调控，癌变机理与细胞衰老的研究，基因表达与调控等，都是与细胞培养技术分不开的。 * 动物细胞融合与植物细胞融合的原理和步骤基本是相似的，只是植物细胞融合必须先制备原生质体。 病毒是最早采用的融合剂。用作融合剂的病毒必须事先用紫外线或β丙内酯灭活，使病毒的感染活性丧失而保留病毒的融合活性。 植物原生质体的制备（1）取材与除菌；（2）酶解；（3）分离；（4）洗涤；（5）鉴定。 * 右下图为显微操作仪。 * * 植物细胞与动物细胞的一个重要差别在于它具有发育的全能性。也就是说在适宜的条件下，一个来自已分化的根、茎、叶等组织的细胞，经过离体培养可以发育成同其亲本一样的完整植株。 * * 培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生细胞状态的过程就是细胞脱分化（dedifferentiation）。 * 植物细胞培养的基本过程包括如下几个步骤：①从健康植株的特定部位或组织，如根、茎、叶、花、果实、胚珠、花药和花粉等，选择用于组织培养的起始材料，称之为外植体。②用一定的化学药剂，最常用的有次氯酸钠，升汞和酒精等对外植体表面消毒，建立无菌培养体系。严格控制无菌条件，这是获得培养成功的重要一步。③形成愈伤组织和器官，外植体块在培养基上形成疏松的愈伤组织，由愈伤组织分化出芽并可诱导形成根的小植株。另一途径是用外植体或愈伤组织细胞经液体悬浮培养诱导胚状体再长成植株。胚状体的形成可大大提高繁殖效率，并可减少变异。 * * 这一技术已有几十年的历史，现已基本成熟，并形成了诸如工厂化生产兰花这样的产值巨大的工业生产体系。但对于某种特定植物而言，尤其是