UnitSevenPlantCellCulture要点.ppt

离体无性繁殖(propagation in vitro) ：利用离体培养技术，将来自优良植株的茎尖、腋芽、叶片、鳞片等器官、组织和细胞进行离体培养，在短期内获得大量遗传性状一致的个体的方法。也称之为微繁(micropropagation)、快速繁殖（rapid clone propagation）。 1960年，Morel提出了利用茎尖离体快速繁殖兰花的方法，在此基础上，国际上建立了兰花工业，取得了巨大的经济效益和社会效益。 植物细胞全能性表现根据细胞类型不同从强到弱: 营养生长中心 形成层 薄壁细胞 厚壁细胞(木质化细胞) 特化细胞(筛管、导管细胞)； 根据细胞所处的组织不同从强到弱为： 顶端分生组织 居间分生组织 侧生分生组织 薄壁组织(基本组织) 厚角组织 输导组织 厚壁组织。 1、由完整的植物器官分离单细胞叶片是分离单细胞的最好材料机械法酶解法 脱分化后的细胞，经过细胞分裂，产生无组织结构、无明显极性的、松散的细胞团称为愈伤组织。愈伤组织的种类： 1、胚性愈伤组织 （Embryonenic callus）：表面光滑、组织结构紧凑、黄绿色、细胞小、易碎、再生力强。 胚性愈伤组织容易形成胚状体，所以被称为胚性愈伤组织。易形成芽。 2、非胚性愈伤组织：表面粗糙、组织结构疏松、细胞大，淡黄色或白色。可以用于悬浮细胞系的建立。 植物组织培养的过程 细胞悬浮培养(cell suspension culture)是将单个游离细胞或小细胞团悬浮在液体培养基中进行培养增殖的技术。 影响悬浮细胞生长的因素： 起始愈伤组织的质量：松散性好、增殖快、再生能力强。其外观一般是色泽呈鲜艳的乳白或淡黄色，呈细小颗粒状，疏松易碎。 接种细胞密度：接种初期的细胞密度过低往往使延迟期加长，悬浮细胞的起始密度一般在0.5～2.5×105个细胞/毫升，低于这一密度则会使细胞生长延迟。 培养条件：方式、温度、继代周期。 培养基的成分及其配制 一、培养基的成分及其作用 （一）无机营养物质 培养的植物组织、器官、细胞或者原生质体需要连续的供给某些无机化学物质，除了C、H、O之外，需要量比较多的元素叫大量元素，需要量比较少的元素叫微量营养元素。 大量元素 培养基的大量元素使用量一般在每升几十至几千毫克。大量元素包括N, P, K, Ca, Mg, S。培养基中加入量最多的是N，N一般以硝酸盐或氨盐，或者两者结合的盐提供 （二）有机化合物 有机物质包括维生素类物质、氨基酸类物质、糖类物质和一些其它的有机添加物 1、AA类物质 绝大多数AA适量时对培养效果都有正象效应。 常用的有Gly、Asn、Gln。 在植物组织培养中，有时也用水解乳蛋白和水解酪蛋白。  3、糖类糖在培养基的作用：（1）为细胞提供合成新物质的碳骨架 （2）为细胞的呼吸代谢提供底物和能量 （3）维持渗透压蔗糖是广泛应用的一种碳源。葡萄糖和麦芽糖也是常用的碳源。 4、其它有机物质1）肌醇（环己六醇）肌醇可以形成果胶物质，是细胞壁的构建物质另外还可以形成植酸，与阳离子结合或形成磷脂，参与细胞膜的组成。利于胚和芽的形成2）天然有机物一些天然的有机物如椰乳、番茄提取物、酵母提取物、马铃薯煮汁也常用于植物组织培养，并表现出了良好的促进作用。 （三）、植物生长调节物质 植物激素是在植物体内合成的，对植物生长发育有显著调节作用的微量有机物，而植物生长调节剂是外源的调节植物生长发育的物质。 无机元素和有机营养构成的培养基仅保证培养物的生存与最低生理活动，只有加入植物生长调节物质，才能诱导细胞分裂、脱分化和再分化。 1、生长素类：1）吲哚类：IAA（吲哚乙酸）、 IBA（吲哚丁酸） 、IPA（吲哚丙酸）2）萘酸类： NAA（萘乙酸）3）苯氧羧酸类：2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、2,4,5-T（ 2,4,5-三氯苯氧乙酸）、 2,4,5-TP（ 2,4,5-三氯苯氧丙酸）等。其中吲哚乙酸在植物体内普遍存在，是生理活性最强的生长素。 生长素的生理作用1、促进细胞生长和细胞分裂；2、诱导受伤组织表面细胞恢复分裂能力；3、形成愈伤组织，促进生根；4、与一定量的细胞分裂素配合共同诱导不定芽的分化、侧芽的萌发与生长、胚状体的诱导。 A：NAA 0mg/L，芽（少），根（无） B：NAA 0.1mg/L，芽（少），根（无），愈伤组织（少量） C：NAA 5.0mg/L，芽（少），根（多），愈伤组织（一定量） 2、细胞分裂素 是一类腺嘌呤衍生物。主要有激动素（ 6-糠基氨基嘌呤KT）、6-苄基氨基嘌呤（6-BA）和玉米素（ZT）等。其中