08第8章 分子发光分析法研讨.ppt

第8章 分子发光分析法 8.1 概论 8.2 分子荧光与磷光光谱分析法 8.2 分子荧光与磷光光谱分析法 2.电子激发态的多重度 3.激发态→基态的能量传递途径 非辐射能量传递过程 辐射能量传递过程 荧光、磷光的寿命和量子产率 2.化合物的结构与荧光 2.荧光光谱(或磷光光谱) 3.激发光谱与发射光谱的关系 镜像规则的解释 8.2.1.6 荧光(磷光)强度与溶液浓度的关系 随着溶液浓度的进一步增大，将会出现发光强度不仅不随溶液浓度线性增大、甚至出现随浓度的增大而下降的浓度效应。 8.2.2 荧光、磷光分析仪器 仪器光路图 仪器框图 8.2.2.2 磷光分析仪器 8.2.3 荧光的常规测定方法 8.2.4 磷光测定的方法 8.2.4 磷光测定的方法 8.2.5 荧光、磷光分析法的应用 8.3 化学发光分析法 8.3.4 化学发光的测量仪器 2. 室温磷光分析 固态基质表面室温磷光分析：分析物通过物理吸附或某种化学作用力被束缚在固体基质表面，增大了刚性，减小了碰撞失活的概率，在严格干燥试样的情况下限制了氧的猝灭作用，显示室温磷光。 胶束稳定的室温磷光分析：磷光体进入表面活性剂的胶束溶液中，微环境和定向约束力发生变化，减小内转化和碰撞能量损失等非辐射失活过程概率，明显增大三重态的稳定性，使磷光强度显著增大。 敏化室温磷光分析 荧光特性对于微环境的敏感性，荧光分析法已广泛作为一种表征技术，用于表征所研究体系的物理、化学性质及其变化情况。 目前，可以采用有机试剂以进行荧光分析的元素已近70种。 磷光具有Stokes位移大的优点，室温磷光分析法得到不断的发展，已成为一种与荧光分析法相互补充的重要分析技术，在生物医学、药物分析、临床检验、农药和植物生长激素的分析以及环境中多环芳烃的检测等方面得到了日益广泛的应用。 8.3.1 概论 化学发光是由化学反应提供的能量激发物质所产生的光辐射。生物发光是指产生于生物体系中的化学发光。基于这类发光现象的分析方法，称为化学发光（或生物发光）分析法。 优点：(1). 灵敏度很高。(2). 仪器设备简单，无须光源和单色器，因而也消除了散射光和杂散光的干扰；(3). 线性范围宽；(4). 分析速度快。 局限：目前可供应用的发光体系尚有限，发光机理有待进一步研究，方法的选择性有待进一步提高。 8.3.2 基本原理 在化学反应过程中，某些化合物接受能量而被激发，从激发态返回基态时，发射出一定波长的光。 A +B = C + D* D* → D + h? （1）能够发光的化合物大多为有机化合物，芳香族化合物； （2）化学发光反应多为氧化还原反应，激发能与反应能相当 ?E=170～300 kJ/mol；位于可见光区； （3）发光持续时间较长，反应持续进行； 化学发光反应存在于生物体(萤火虫、海洋发光生物)中，称生物发光(bioluminescence)。 化学发光效率 化学效率： 发光效率： 时刻t 的化学发光强度(单位时间发射的光量子数)： dc/dt 分析物参加反应的速率； 3.化学发光强度与化学发光分析的依据 在化学发光分析中，被分析物相对于发光试剂小得多，对于一级动力学反应： dc/dt =Kc； K 为反应速率常数。 定性依据： （1）在一定条件下，峰值光强度与被测物浓度成线性； （2）在一定条件下，曲线下面积为发光总强度(S)，其与被测物浓度成线性： 8.3.3 化学发光反应的类型 8.3.3.1 气相化学发光反应 a. 一氧化氮与O3的发光反应 NO + O3 → NO2* NO2* → NO2 + h? 发射的光谱范围：600～875nm，灵敏度1ng/cm-3； b.氧原子与SO2、NO、CO的发光反应 O3 → O2 + O （1000 ?C石英管中进行） SO2 + O + O → SO2* + O2 SO2 * → SO2* + h? 最大发射波长：200nm；灵敏度1ng/cm-3； O3 → O2 + O （1000 ?C石英管中进行） NO + O → NO2* NO2 * → NO2 + h? 发射光谱范围：400～1400nm