实验5细菌的生化反应实验要点.ppt

掌握细菌鉴定中常用生化实验的原理和方法 了解细菌生化试验在细菌鉴定及诊断中的重要意义 二、实验原理 不同的细菌具有不同的酶系统，对糖类和蛋白质的分解能力不同，最终形成的分解代谢产物不同。 通过对代谢产物的检测，可鉴定细菌。 吲哚试验Indol 细菌分解培养基中的色氨酸，生成吲哚，吲哚可与试剂中的对二甲氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色 反应结束加试剂0.5ml 两液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性 甲基红实验（M.R实验） 微生物进行混合酸发酵，产生各种有机酸——pH下降——加入指示剂甲基红——红色 V.P实验原理 OF :Oxidize and ferment 氧化发酵实验 2. 结果观察 （1）吲哚试验：于培养24h后的蛋白胨水培养基内加3-4滴乙醚，摇动数次，静置1-3分，待乙醚上升后沿试管壁徐徐加入2滴吲哚试剂，在乙醚和培养物之间产生红色环状物为阳性反应。 （三）金黄色葡萄球菌的生化鉴定 以16种生化鉴定管检测金黄色葡萄球菌对各种物质的利用情况，每组一套（尿素、蔗糖、精氨酸水溶液、木糖、乳糖、甘露糖、木糖醇、麦芽糖、蕈糖、甘露醇、乙酰葡胺、硝酸盐、蜜二糖、果糖、葡磷胨水、山梨醇），将实验结果记入表格中。 接种方法：将鉴定管上端用砂轮划痕折断，后用接种环取纯菌接种，置于灭菌平皿或小试管架上。 培养：35℃培养12-24h，观察记录结果。 葡萄球菌属TH编码鉴定结果记录表 * * 实验五 细菌的生化反应实验 一、实验目的 菌 种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、未知菌斜面 培养基：葡萄糖发酵培养基试管、乳糖发酵培养基试管、 蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、 明胶发酵培养基等。 试 剂：大肠杆菌IMViC鉴定管、金黄色葡萄球菌生化鉴定管、 甲基红指示剂、40%KOH、5%α-萘酚、乙醚、吲哚试剂等 其他材料：试管架、酒精灯、接种环等 三、实验材料 （一）糖发酵试验 1. 用记号笔在各试管上标明发酵培养基名称和所接种的细菌 取葡萄糖发酵培养基管3支，分别接种大肠杆菌、未知菌，第三支不接种，作为对照。另取3支乳糖发酵培养基，作同样的操作。 3. 37℃ ，24-48h。 4. 观察颜色变化及有无气体产生。 三、实验步骤 结果： 将结果填入下表，“ ”表示产酸或产气；“+”表示产酸不产气,“-”表示不产酸不产气。 糖类发酵 大肠杆菌 未知菌 对 照 葡萄糖发酵 ? ? ? 乳糖发酵 ? ? ? （二）IMViC试验(吲哚、甲基红、伏-普、柠檬酸盐） 1. 接种和培养 用接种针将大肠杆菌与未知菌分别接种于2支蛋白胨水培养基（吲哚试验），2支葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红试验和伏-普试验），2支柠檬酸盐斜面培养基，置37℃ 培养2d。 （2）甲基红试验：于培养24h后，将1支葡萄糖蛋白胨水培养物内加甲基红试剂2滴，培养基变为红色者为阳性，变黄色者为阴性。 （3）伏-普试验：于培养24h后，将1支葡萄糖蛋白胨水培养物内加入5-10滴40%KOH，然后加入等量的5% α-萘酚，用力振荡，再放入37℃温箱中保温5-10分，以加快反应速度。若培养物呈红色者为V-P试验阳性。 （4）柠檬酸盐试验：培养48h后观察柠檬酸盐斜面培养基上有无细菌生长和是否变色，蓝色为阳性，绿色为阴性。 柠檬酸试验 伏-普试验 甲基红试验 吲哚试验 大肠杆菌 未 知 菌 对 照 IMViC试验 菌 名