实验二特异性体液免疫要点.ppt

实验二 特异性免疫-体液免疫（1） 操作 对流免疫电泳（4人/张） 玻片凝集反应（1人/张） 补体参与的反应 （4人做溶血反应，另4人做补体结合反应） 示教 单向琼脂扩散试验 双向琼脂扩散试验 抗原、抗体的检测（血清学反应） 体内：Ag + Ab→杀菌、溶菌、调理、超敏反应等 体外：Ag + Ab—电解质、时间→肉眼可见反应 （凝集、沉淀、补体结合反应等） 基本原理 巳知Ag测Ab，用于协助诊断疾病； 巳知Ab测Ag，用于细菌鉴定和分型。 常见的抗原抗体反应种类 凝集反应 沉淀反应 补体参加的反应 免疫标记技术 中和反应等 特点 特异性：抗原表位与Ig超变区互补 可逆性：非共价结合 可见性：比例适宜形成大分子肉眼可见反应 比例不适合，稀释过剩者 颗粒性抗原：形成大分子所需Ab较少，稀释Ab （凝集反应） 可溶性抗原：形成大分子所需Ab较多，稀释Ag （沉淀反应） 一、沉淀反应 琼脂扩散试验： 单向琼脂扩散：定量试验，测血清中各种Ig及补体 各成分的含量。 双向琼脂扩散：用于测定Ag/Ab，分析纯度及效价。 对流免疫电泳：双扩+电泳技术 原理:抗原、抗体在电场中双相扩散，二者比例适合处 形成白色沉淀线 缓冲液:PH8.6 Ag等电点PH4-5、Ab为PH6-7，Ag带负电多 电泳：Ag ? 移向阳极(Ag加入阴极孔内) 电渗：液相?移向阴极 Ag：电泳力电渗力?阳极;Ab:电泳力电渗力?阴极 用于HBsAg及AFP初筛。 特异性差，敏感性比双扩高10-15倍。 二、补体参与的反应 二个系统： 指示系统：SRBC、溶血素 待检系统：巳知Ag/Ab测Ab/Ag 五个成分：补体、SRBC、溶血素、Ag/Ab。 巳知Ag+待检血清（Ab）+补体+SRBC+溶血素?不溶血（+） 巳知Ag+待检血清（？）+补体+SRBC+溶血素?溶血（-） 补体结合反应示意 颗粒性Ag（细菌、细胞等）+ Ab—电解质、时间→凝集块 ? ? 凝集原 凝集素 直接凝集反应 玻片法：定性试验。 巳知Ab测Ag，用于血型、细菌鉴定。 试管法：定量试验。如肥达反应 实验报告 记录对流免疫电泳结果 记录玻片凝集反应结果 记录溶血反应和补体结合反应结果（表格式） * 环状沉淀反应：巳知Ab测Ag 用于：法医鉴定血迹、昆虫嗜 血性，诊断炭疽病 （称Ascoli试验） 絮状沉淀反应： 康氏反应协助诊断梅毒 可溶性Ag + Ab—电解质、时间→沉淀物 ? ? 沉淀原 沉淀素 抗原 抗体 特点：操作简便，特异性高，敏感性较低，需时较长。 溶血 不溶血 巳知Ag 待检血清（？） 补体 SRBC 溶血素 SRBC 溶血素 巳知Ag 待血清（Ab） 补体 三、凝集反应 间接凝集反应 可溶性Ag（外毒素、细胞渗出物等）吸附载体+Ab→凝集 常用载体：“O”型红细胞、SRBC、乳胶颗粒等 反向间接凝集：Ab吸附载体测可溶性Ag 用于测HBsAg、AFP等 间接凝集抑制试验：妊娠试验 孕尿（HCG）+抗血清+胶乳抗原?不凝集（+） 常尿（HCG）+抗血清+胶乳抗原?凝集（-）