实验十七动物球虫病实验室诊断技术要点.docVIP

实验十七 动物球虫病实验室诊断技术 一、实验目的及要求 1.熟悉球虫卵囊的形态特征。 2.掌握分离球虫卵囊的方法。 3.了解常见球虫的种类。 4.熟悉鸡球虫感染后的病变记分和粪便记分方法。 二、实验器材 1.仪器设备。 上海XSP-2C生物显微镜（具备10倍目镜和低倍、高倍物镜及油镜）；目镜测微尺和物镜测微尺；盖玻片、载玻片、牙签、洗瓶、平皿；剪刀及手术刀；离心管；血细胞计数板。 2.实验材料。 感染球虫的患鸡,常见的球虫卵囊,蔗糖、食盐、硫酸镁、铬硫酸、重铬酸钾等。 三、实验方法、步骤和操作要领 （一）球虫的形态观察 随宿主粪便排出的卵囊呈卵圆形、圆形或球形；无色、淡黄色或淡绿色，其形态大小随球虫种类而异。外被有两层囊壁，外壁较厚，轮廓清晰；内壁较薄。内含颗粒状的胞质(即原生质团)。卵囊内具有一至多个孢子囊，每个孢子囊内含有一至多个子孢子，因种类而异。艾美耳属的球虫种类经发育后，原生质团分裂为四个孢子囊，每个孢子囊内含有两个子孢子。有些种类的球虫在卵囊的极端具有明显的卵膜孔，有些球虫的卵囊内膜突出于卵膜孔之外，形成极帽。 畜禽常见球虫的种类： 1．牛球虫。 文献报道的有10种，其中9种为艾美耳属（Eimeria）球虫，另外一种为阿沙卡等孢球虫（Isospora akscaica）。以邱氏艾美耳球虫(E. zurnii)致病力最强，牛艾美耳球虫(E.bovis)致病力较强，它们寄生于牛消化道的上皮细胞。 (1)邱氏艾美耳球虫(E. zurnii)。 卵囊呈亚球形或球形，平均直径为18.6μｍμｍμｍμｍ. 兔球虫。 种类很多，有16种，属艾美耳属。仅介绍两种如下。 (1)斯氏艾美耳球虫(E.stiedae)。 寄生于肝、胆管上皮细胞内。致病力最强。卵囊甚大，长椭圆形，大小为26～μｍ～μｍ～μｍ～μｍ. 鸡球虫。 报道的有9个种，属艾美耳属，世界公认的有7个种。 (1) 柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)。 寄生于盲肠，其卵囊大小为22μｍ×19μｍ，形状指数为1.16，裂殖体很大，直径可达54μｍ，第一代裂殖体包含的裂殖子可达900个，第二代为350个，孢子化时间为18ｈ，潜隐期为1ｈ (2) 毒害艾美耳球虫其第一、二代裂殖生殖在鸡小肠，第三代裂殖生殖和配子生殖在盲肠。卵囊呈卵圆形，大小为1～2μｍ×11～μｍ，囊壁无色、光滑。具极粒，孢子囊呈卵圆形，有斯氏体，无残体。 (3) 堆型艾美耳球虫寄生于十二指肠卵囊呈卵圆形，大小为1～2μｍ×～μｍ。光滑孢子囊呈卵圆形，有斯氏体具极粒，无残体。 (4) 布氏艾美耳球虫寄生于小肠后段、直肠和盲肠近端区。卵囊大小为μｍ×μｍ，是鸡球虫中仅次于巨型艾美球虫的第二大型卵囊。形状指数为1.31。有一极粒，无残体和卵膜孔。裂殖体直径为30μｍ。孢子化时间为18ｈ，潜隐期为120ｈ。寄生于小肠中段。卵囊很大，最大的卵囊达到42.5μｍ～29.8μｍ卵囊黄色。其形状指数为1.47。最大的裂殖体直径为9.4μｍ (6) 和缓艾美耳球虫(E.mitis)。 寄生于鸡小肠前段。卵囊较小，有一极粒，无卵膜孔，也无残体μｍμｍ (7) 早熟艾美耳球虫寄生于小肠上段1／3处。卵囊呈卵圆形，大小为21.3μｍ×17.1μｍ，形状指数为1.24，光滑无色，无卵膜孔和残体，具极粒。孢子囊无残体。 4. 鸭球虫。 鸭球虫常见于北京鸭群中，对北京鸭具有致病力的球虫有两种。（图17-7）。 （1）毁灭泰泽球虫（Tyzzeria perniciosa）。 寄生于小肠前段，致病力强。卵囊呈短椭圆形，较小，呈淡绿色，，大小为1～μｍ×～μｍμｍμｍ（2）菲莱氏温杨球虫（Wenyonella philiplevinei）。 寄生于小肠，致病力弱。卵囊呈卵圆形，浅淡绿色，外层薄而透明，内层浅蓝，大小为～μｍ×～μｍ卵膜孔μｍμｍ （二）卵囊的分离与孢子化 1．卵囊的分离。 卵囊存在于宿主粪便和组织中。分离粪便中的卵囊较多采用饱和食盐(或硫酸镁、蔗糖等)溶液漂浮法和离心法；分离组织中的卵囊一般采用铬硫酸分离法和蛋白酶消化法。单卵囊分离法是指从混合虫种的卵囊中分离出单个卵囊，以备进一步扩增所需的“克隆”卵囊。 尽管有许多分离卵囊的方法，但其基本原理是一样的，即根据卵囊与杂质比重的不同。对于组织中的卵囊，尚需借助消化液或酸的作用，破坏组织中的细胞，以利卵囊的提纯。 （1）漂浮法。 可用很多种溶液和很多种方法，其关键是溶液的比重要适当(一般 1.2左右)；再者，溶液对卵囊的活性没有不良影响。这里介绍几种常