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RNA 极为脆弱
RNA的大敌是RNase
RNase无处不在
培养液、体液
皮肤表面，唾液飞沫，皮屑
花粉、昆虫
孢子（细菌、真菌）
RNase特别难搞定
极难失活，普通高温灭菌无法灭活，变性后可复性
可借助DEPC等化学物质灭活，但DEPC有很大的局限性
致癌性强，挥发，吸入蒸汽即可致癌
不能处理Tris为基础的溶液，而大量RNA实验的溶液都是Tris-HCl / Tris-HEPES系统
DEPC本身和DEPC分解的产物会抑制许多酶反应
养成良好的操作习惯
做RNA实验时
严禁开窗通风！（可以开门）需强制通风时请打开通风橱电源
操作者请戴口罩，长发飘飘的MM请戴头套
观看实验者可不戴口罩和头套，但需保持一定距离，说话时避免直接朝向实验方向，避免唾液飞沫中RNase污染
实验室里走动慢一点，避免激起过大的气流
收集垃圾的容器经常清理和清洗
养成良好的操作习惯
操作台面的清洁
保持操作台面干净，经常用抹布清洁，可用水和酒精混合液杀菌
重要实验前用专用RNase消除剂喷洒清洁台面和器具表面
喷洒要适量，喷洒时最好戴口罩，因为RNase消除剂对人体还是有一点危害的
严禁对着人喷！
养成良好的操作习惯
RNA实验所用溶液和器具（如枪头）需要灭菌者，两次高压灭菌即可消除RNase，无需使用致癌的DEPC
严禁用手直接接触离心管、反应管等外表面！必须戴手套！
养成良好的操作习惯
节约手套，但别太节约
至少每4-5小时要换一双手套
如果有大量短时操作需频繁更换手套，可优先使用薄塑料手套
Trizol相关操作请在通风橱里进行
Trizol沾染的固体和液体垃圾请收集在通风橱内的专用瓶子内
养成良好的操作习惯
制胶、跑胶的器具也需要保持干净，防止RNase污染
不要徒手接触
玻璃板和托盘经常用洗涤液浸泡和清洗
制胶过程中所用的小锥形瓶也要保持干净
染料的使用
后染法染胶
制胶时不加任何染料
照常跑胶，核酸迁移速率会比预染法快约15%——别跑过了！
跑胶完毕，将胶放进紫外灯台
将染料稀释1000-2000倍(0.5-1ul in 1ml buffer/water)均匀涂在胶上
关住灯台的门，暗中染色5分钟
打开紫外灯，观察、照相
完毕后将灯台擦干净
预染法
后染法
干净能带来什么
从10个RNA分子即可获得可靠的qRT-PCR结果
线性度接近完美
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