生物大分子分离技术研究进展要点.docxVIP

关于生物大分子分离技术的研究进展汇报 摘要：生物大分子的分离纯化成本一般占整个生产过程的50-90％以上，如何通分离纯化手段快速、高效地获得目标产物并降低生产成本是生物分离技术研究的一个重要课题。本文对现阶段有关生物大分子的分离技术进行适当总结并加以相关赘述，旨在了解当前关于生物大分子分离技术的研究进展情况。 关键词：生物大分子；分离；进展 一、引言 21世纪是生物工程技术占主导地位的时代，而生化分离是生物工程技术转化为生产力过程中必不可少的重要环节。随着生物工程与生命科学的发展，对蛋白质等生物大分子纯化分离提出了越来越高的要求，由于生物工程技术特别是细胞工程、基因工程、蛋白质工程等技术产品的特殊性，要求分离技术既具有较高的分离效率又不影响产品的生物活性，即要求获得高活性、高纯度的蛋白质。近十年来，随着生命科学、生物技术和制药工业的迅速发展，对于多肽、蛋白质、酶等活性生物大分子的分离与纯化要求日益提高，这类分子通常来自天然产物或发酵液中，其初始浓度一般较低，而且对温度、pH值、剪切力、有机溶剂等非常敏感，易于失活或降解。对于这类分子的高效分离与提纯，是生物工程下游技术的关键性问题之一。 生物大分子包括多肽、酶、蛋白质、核酸（DNA和RNA）以及多糖等。生命科学的发展给生物大分子分离技术提出了新的要求。各种生化、分子研究都要求得到纯的，以及结构和活性完整的生物大分子样品，这就使得其分离技术在各项研究中起着举足轻重的作用。 生物大分子的制备具有如下主要特点：生物材料的组成极其复杂；许多生物大分子在生物材料中的含量极微。分离纯化的步骤繁多，流程长；许多生物大分子一旦离开了生物体内的环境就极易失活（因此分离过程中如何防止其失活，就是生物大分子提取制备最困难之处）；生物大分子的制备几乎都是在溶液中进行的，温度、pH值、离子强度等各种参数对溶液中各种组成的综合影响，很难准确估计和判断。这些都要求生物大分子的分离技术以此为依据，突破这些难点，优化分离程序，以获得符合要求的生物大分子样品。 二、传统分离方法 溶剂萃取法：是用一种溶剂将产物自另一种溶剂（如水）中提取出来，以达到浓缩和提纯的目的，是20世纪40年代兴起的一项化工分离技术，并很快应用到了生物分子的提取和分离上。最初是用于抗生素、有机酸、维生素等生物小分子的提取。最近几十年来随着与其它技术的结合而产生了一系列新的分离技术，如逆胶束萃取、超临界萃取、液膜萃取等，可以用于生物大分子如核酸、蛋白质、多肽等的提取和精制。 透析：已成为生物化学实验中最简便最常用的分离纯化技术之一，在生物大分子的制备过程中，除盐、少量有机溶剂、生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术，同时半透膜的材料也更加多样化、透析方式也更加丰富。 超滤：是一种加压膜分离技术，自20世纪20年代问世后，直至60年代以来其发展迅速，很快由实验室规模的分离手段发展成重要的工业单元操作技术。超滤作为一种高效分离技术，广泛用于含有各种小分子溶质的各种生物大分子的脱盐、浓缩和分级分离。 盐析法：使蛋白质沉淀出来已有80多年的历史。其突出的优点是成本低，不需要特别昂贵的设备；操作简单、安全；对许多生物活性物质具有稳定作用。该法虽然分辨能力不高，但在粗级分离中仍然被经常采用。 有机溶剂沉淀法：也是较早使用的沉淀方法之一。有机溶剂对于许多蛋白质、核酸、多糖和小分子生化物质都能产生沉淀作用。其引起沉淀的主要原因在于改变介质的介电常数。以及类似盐析的争夺水化水现象。 等电点沉淀法：利用具有不同等电点的两性电解质，在达到电中性时溶解度最低，易发生沉淀，从而实现分离的方法。氨基酸、蛋白质、酶和核酸都是两性电解质，可以利用此法进行初步的沉淀分离，此法主要用于在分离纯化流程中去除杂蛋白，而不用于沉淀目的物。非离子型多聚物是20世纪60年代发展起来的一类重要的沉淀剂。它们具有很强的亲水性和较大的溶解度。在溶液中可通过空间位置排斥作用使生物大分子、病毒和细菌等聚集沉淀。该法温和的操作条件和较高的沉淀效能，使得其经常被用于细菌、病毒、核酸和蛋白质的分离，其中应用最多的多聚物是聚乙二醇。 三、现代分离方法 1 色谱技术 又称为层析技术，因其具有多种不同的分离机理，设备简单、便于自动化控制等特点，是目前生化分离分析中最常用的技术之一，在生物工程下游处理中占有主要的地位。传统的色谱柱是管式结构，流体在色谱柱内以轴向从一端流向柱的另一端，色谱填料是软的或硬的多孔颗粒填料，这类色谱柱具有分离效率高，柱容量大的特点，但存在着以下缺点：流速慢，生产效率低，蛋白质在长时间分离过程中易变性失活；压降大，对分离系 要求高；不易放大，在放大规模时，需要适级摸索分离条件，这是大规模分离纯化突出困难之一，因此迫切需要发展出新的色谱技术为解决。 液相色谱法：是分析化学中发展最快，应