课堂报告：生物强化技术及应用(赵翠)解析.pptVIP

主要内容 生物强化的概况 高效菌种的制备 工艺的调控 生物强化主要的技术方法 生物强化的工程应用 讨论与展望 生物强化的基本原理 生物强化技术（Bioaugmentation，BA技术），是向污染物处理系统中投加特殊的菌种，去除某一种或某一类有毒有害、难降解的有机物，以保持和提高系统的处理效率。 生物强化技术菌剂的研发 异形生物质条件下优势菌种的筛选 外部的选择压力(异形生物质) 驯化培养 分离（稀释涂平板法、倒平板法等） 纯化（平板划线法） 富集培养（发酵） 分子遗传育种（原生质体、基因工程） 将外源基因通过体外重组后导入受体细胞内使这个基因能在受体细胞内复制、转录、翻译表达的操作改变物种的遗传特性基因工程 原生质体育种 原生质体融合，跨越不同种属的遗传障碍，使菌株具有两套以上亲本的遗传基因。 应用： 黑曲霉M70（酸性蛋白酶）与米曲霉 M4（中、碱性蛋白酶和淀粉酶）融合 提高了降解淀粉、蛋白的能力（王建华 ，2007） 酵母菌与降解苹果酸裂殖酵母属间融合 提高了其发酵能力（丁朋晓 ，2007） 基因工程育种 应用： Burkholderiacepacia G4，芳香族化合物的存在共代谢三氯乙烯（TCE） 插入Tn5，直接表达降解TCE的邻甲苯单氧化酶（Winker J ，1995） 将Alicaligenes eutrophus JMP134菌，含有质粒 pJP4，携带降解2,4- 二氯苯氧基乙酸(2,4-D)基因产生抗汞性能 转入土壤，产生接合子，含有质粒 pJP4 ，携带降解2,4- 二氯苯氧基乙酸(2,4-D)基因产生抗汞性能（Digiovanni GD，1996） 目前应用广泛的商品化菌剂 微生物与基质间的作用 优势菌种直接作用 共代谢基质协同作用 微生物在水处理系统中的存在形态 游离悬浮状态-竞争生存，易流失 接触固着生长-固定在膜表面的生物更稳定、增加了细胞膜的接触时间 质粒结合的最佳环境象是琼脂平板和滤膜表面 （Angles ML, 1993） 固定化方法 吸附法(载体结合法)、包埋法、交联法(架桥法)、无载体固定化技术 固定化技术 吸附法— 包埋法— 交联法— 无载体固定化— 几种微生物固定化载体的性能 分子生物学的检测技术 特异微生物检测及定量化技术 生物标记基因 基于PCR的技术 微生物群落结构组成和动态演替规律研究 基因指纹技术 荧光原位杂交（FISH） 生物标记基因 外源DNA序列插入微生物体内，使其具备一定基因型或表现型 可用于跟踪环境中特定微生物的检测方法 基于PCR的技术 PCR是一种在体外扩增核酸序列，从而得到多个核酸拷贝的技术。 PCR与DNA技术相结合,实现了环境样品中微量特异片断的检测。 基因指纹技术 基因指纹技术可提供微生物菌群基因的多态性谱图。 环境样品中不同微生物的混合物中序列的多样性和不同序列的丰度反映原始样品中微生物种群的多样性和不同物种的丰度。 生物强化系统微生物菌群结构分析的基因指纹技术 限制性长度多态性（restriction fragment length polymorphism, PFLP） 变性梯度凝胶电泳（danaturing gradient gel electrophoresis, DGGE） 温度梯度凝胶电泳（temperature gradient gel electrophoresis, TGGE） PCR-单链构象多态性（single strand conformational polymorphism, SSCP） 荧光原位杂交（FISH） 微生物细胞在固定材料上脱水后，与带有荧光染料标记的寡核糖探针在一定温度下混合。与探针碱基对完全互补序列的随即与探针发生杂交，从而使该菌体在荧光显微镜下发出荧光。 原位杂交技术结合了分子生物学的精确性和显微镜的可视性，能够在自然的微生境中快速监测和鉴定不同微生物个体，同时对微生物群落进行评价。 讨论与展望 生物强化的意义 提高了对目标污染物的去除率； 改善污泥性能和减少污泥总量； 增强系统的抗冲击负荷能力和稳定性； 加快系统启动速度。 展望 如何定性定量地分析微生物与污染物降解的相关性; 确定生物强化技术工艺工程设计的关键参数, 研究快速高效的投加菌方式及生物强化的安全检测技术 建立投菌量、活性检测、菌株或复合菌群等参数的模型，充分发挥其在环境治理中的作用。 References Angles ML , Marshall KC, Goodman AE. Plasmid transfer between marine bacteria in the aqueous phase and biofilm in r