组织化学技术研讨.docVIP

组织化学技术常用仪器设备、器皿准备及试剂配制 一、实验仪器1．37℃恒温箱。 2．恒冷切片机或半导体制冷切片机。 3．冰箱及低温冰箱。 4．显微镜。 5．200(l、100(l及20(l可调微量加样枪。 二、器皿准备 1．量筒（量取液体）。 2．烧杯（混匀及溶解）。 3．三角烧瓶（加热溶解，特点用于易挥发的液体）。 4．容量瓶（测定溶液体积用）。 5．玻棒（搅拌用）。 6．pH计或试纸。 7．载玻片。 8．盖玻片。 9．湿盒（免疫组织化学反应用）。 三、玻璃器皿的清洁 用自来水冲洗 用毛刷沾肥皂水或稀释了的洗洁精液洗擦 自来水冲洗，晾干 放入清洁液内浸泡一天 用自来水冲洗干净，最后用少量蒸馏水冲洗 自然晾干或倒置于烤箱中 注意：干净的玻璃器皿应是无水膜且光滑的 四、新载玻片的洗涤法 直接入清洁液浸泡过夜 用自来水冲洗干净 蒸馏水漂洗后烤干备用 五、载玻片包被的方法 APES包被法：将配制的APES-丙酮黏附剂（APES 1份；丙酮49份，现用现配）倒于染缸中，将烤干的玻片放于染缸中30秒，再入纯丙酮或蒸馏水中涮去未结合的APES；37℃烤干，把处理过的玻片放于切片盒中备用。 铬明胶包被法：配制铬明胶溶液（0.5%明胶＋0.1%铬明矾，用60℃左右蒸馏水先溶解明胶后，再加入铬明矾，待完全溶解后，过滤），将玻片浸入溶液中30秒，取出后37℃烤干备用。 多聚赖氨酸包被法：配制0.1mg/ml多聚赖氨酸溶液，均匀涂抹于载玻片上，自然凉干后即可使用。 六、主要试剂及配制 溶液的配制 溶液大多数以水为溶媒，其浓度随溶媒的容量和溶质的重量而定。溶液的浓度通常用下列三种方法来表示。 一、百分比溶液 浓度用溶质对全部溶液量的百分比表示。 稀溶液的配法：如不说明溶媒是什么，即指水溶液。 例1．0.2%伊红水溶液——即将0.2克伊红溶解于100毫升的蒸馏水中。 例2．0.1%固绿酒精溶液——即将固绿0.1克溶解于100毫升的95%酒精中。 浓溶液的配法：配制高浓度的溶液，应在100毫升的水中减去溶质重量的水。例如15%的食盐水溶液，则应以100－15＝85，即量取85毫升的水加入15克的食盐即得15%的食盐水溶液。 二、克分子溶液 浓度用1升溶液中所含溶质的克分子数表示。用这个方法表示溶液的浓度称为克分子溶液，常以M代表。例如0.2M溶液即为1升溶液中含0.2克分子溶质的溶液。其配制方法如下： 例如0.5M蔗糖溶液 1．先计算蔗糖的分子量（C12H22O11＝342.2）。 2．再称取0.5克分子的蔗糖C12H22O11∕2，即171.1克。 3．投入溶积为1升的量瓶中，瓶颈上有刻线标明容积到上恰等于1升。 4．注入蒸馏水使蔗糖溶解，水加到刻线为止。 三、当量溶液 浓度用1升溶液中所含溶质的克当量表示。这种溶液称为当量溶液或规定溶液，以N表示。如1升溶液中含1克当量，即称为1当量溶液（1N）。 在配制当量溶液时，其当量的计算因各种化合物（酸、碱、盐）而异。酸的当量是以酸分子中可被金属取代的氢原子数去除。碱的当量等于其分子量被碱中金属的原子价去除。至于盐类的当量可用其分子中金属的原子数及金属的原子价去除分子量求得。 例如：HNO3（分子量63）的当量等于 63∕1＝63 H2SO4（分子量98）的当量等于 98∕2＝49 Ca(OH)2（分子量74）的当量等于 74∕2＝37 Al2(SO4)3（分子量342）的当量等于 342∕2×3＝57 其配制步骤与克分子溶液相似，不过在第二步称取的克分子量换以克当量而已。 硫酸清洗液 成 分 配方Ⅰ 配方Ⅱ 配方Ⅲ 重铬酸钾 80g 100g 100g 自 来 水 1000ml 750ml 1000ml 浓 硫 酸 120ml 250ml 100ml 配制方法：先将重铬酸钾在水中溶解，然后顺玻棒缓慢加入浓硫酸，边加边搅拌，防止过度发热。常用缓冲液 （1）0.1M磷酸缓冲液（PB，pH7.2~7.4）的配制 磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O） 7.4g 磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O） 72.5g D.W. 2500ml （2）0.01M PBS（pH7.2~7.4）的配制 NaCl2 9g 0.1M PB 100ml D.W. 900ml （3）0.2M pH4.8醋酸缓冲液 冰醋酸 1.2ml