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实验四 聚丙烯酰胺凝胶电泳 实验目的 1.掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理及其应用范围； 2.熟悉聚丙烯酰胺凝胶电泳相关缓冲液的配制方法。 实验原理 1.聚丙烯酰胺凝胶简称为PAGE为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native）及十二烷基硫酸钠——聚丙烯酰胺凝胶（SDS）； 2.非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。而SDS仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质。 3.SDS是一种阴离子去污剂，具有变性和助溶特性，可按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，并打断蛋白质的氢键和疏水键，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷， 使SDS蛋白质复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响； 4.SDS可使蛋白质在Tris-甘氨酸 pH8.3 缓冲液中，通过电泳的方法分离不同分子量蛋白质或测定蛋白质分子量的实验技术。 实验步骤 （一）相关溶液的制备 1. 30%丙烯酰胺（Acr）：称Acr 29g，甲叉双丙烯酰胺（Bis）1g，加蒸馏水至100mL，过滤后置棕色瓶中，4℃贮存可用1-2月。 2. 10%SDS（十二烷基磺酸钠）：10g SDS 68℃助溶于纯水。 3. 1.5mol/L pH8.8 Tris-HCl缓冲液：称取Tris18.2