16个氨基酸多肽对高脂饮食CCl4诱导非酒精性脂肪肝保护性作用及机制研究.pdfVIP

中文摘要 16个氨基酸多肽对高脂饮食+CCl4诱导的非酒精性脂肪肝的 保护性作用及机制研究 摘 要 目的：肝脏疾病是一个巨大的全球性公共卫生问题，长期肝损伤无法 获得及时有效的治疗将最终发展为肝衰竭或肝癌，显著降低病人生存质量 甚至直接威胁生命。随着社会的进步，人类生活品质的显著提高，脂肪性 肝病已跃升为第二大高发性肝病，仅次于病毒性肝炎，严重威胁着人类的 健康。究其原因，快节奏的现代化生活以及不良的饮食习惯影响巨大。高 脂饮食+CCl4诱导的慢性肝损伤模型是一个较为理想的慢性脂肪性肝病大 鼠模型，用来模拟人因不良饮食习惯导致的慢性脂肪性肝病。 为寻找早期肝炎临床诊断的生物标志物，本室前期运用基质辅助激光 解吸离子化飞行时间质谱(MALDI—TOF MS)从慢性肝炎病人血清中检 测到的一个含量较高的多肽，即16个氨基酸多肽片段。经体外培养的细 胞研究发现该多肽高表达可改变HepG2细胞的增殖周期，促进细胞进入 S期。 迄今为止，尚无关于该多肽在慢性脂肪性肝病动物模型中生理、病理 以及作用机制的研究。依据本室前期研究成果已证实该多肽针对静脉注射 Con A诱导的急性肝损伤小鼠模型具有保护作用，推测其可能在慢性脂肪 性肝病进展中同样发挥保护作用，故进行本研究。本研究利用高脂饮食 +CCl4诱导的大鼠非酒精性脂肪肝模型研究该16个氨基酸多肽片段在非 酒精性脂肪肝病中的治疗作用，并初步探讨其作用机制，为下一步临床肝 病治疗提供实验依据。 方法： 1 16个氨基酸多肽片段治疗性给药对大鼠慢性脂肪性肝损伤的作用 将56只雄性SD大鼠随机分为7组，除正常组分别在相应给药时点 通过腹腔注射给予生理盐水并普通饲料进食外，其余各组大鼠均通过腹腔 注射给予CCl4溶液每3天1次(3ml／kg)，高脂饮食喂养，持续4周。 将己分好组并完成慢性脂肪性肝损伤模型建立的56只大鼠，除正常组分 别在相应给药时点通过尾静脉注射给予生理盐水外，其余各组大鼠分别经 万方数据 中文摘要 灌胃给予复方甘草酸苷稀释液(120mg／kg)，降脂通络软胶囊稀释液 (80mg／kg)或经尾静脉注射给予200、400、80099／kg体重16个氨基酸 多肽，每3天1次，持续治疗6周后，处死动物。收集大鼠血液，分离血 清，采用全自动生化分析仪测定血清ALT、AST、TBIL、TG及CHOL 水平。通过血清学指标观察该多肽治疗性给药对高脂饮食+CCl4诱导肝损 伤的影响。 2肝组织病理学检测 治疗性给药结束后处死动物，分离肝脏，分别于同一位置切取适当大 小的肝组织进行固定，石蜡包埋，行59m连续切片后进行HE染色，于 光学显微镜下观察肝组织病理学形态，并采集图像。 3肝组织苏丹黑B脂肪特殊染色 制作冰冻切片取组织时应注意不能太大太厚，大小为24x24x2mm左 右为宜。行6．109m切片后进行苏丹黑B染色，观察组织病理学形态，并 采集图像。 4肝组织MCP一1表达水平的测定 应用免疫组化方法检测肝组织MCP．1蛋白表达水平，通过多功能真 彩色细胞图像管理系统软件，捕获由显微镜采集的组织图片，选取其中阳 性表达最强的5个视野进行计算，得出阳性细胞数及阳性细胞显色强度， 从而得出免疫组化评分(IHS)的数值。探讨该多肽治疗性给药对高脂饮 食+CCl4诱导肝损伤的作用机制。 5肝细胞脂肪变性程度与MCP．1蛋白表达水平的相关性分析 肝组织MCP．1蛋白表达水平在不同程度肝细胞脂肪变性中存在差 异，通过HE染色观察到的肝细胞脂肪变性程度与MCP一1蛋白表达水平 的相关性分析，分析不同程度肝细胞脂肪性变性对MCP。1蛋白表达的影 响，从而进一步证实该多肽片段对肝脏保护作用的机制。 结果： l 16个氨基酸多肽片段治疗性给药对高脂饮食+CCl4诱导的慢性肝 损伤的影响 多肽片段20099／kg组、80099／kg组、西药组、中药组及正常组血清 ALT水平均显著低于模型组(尸O．05)；多肽片段20099／kg组、80099／kg 组及正常组血清AST水平均显著低于模型组(P0．05)，且多肽片段 万方数据 中文摘要 800I，tg／kg组血清AST水平显著低于西药组(尸O．05)：各组血清TBIL水 平均无明显差异；多肽片段20099／kg组、40099／kg组、80099／kg组血清 CHOL水平均显著低于模型组(氏O．01)，其中多肽片段40099／kg组、 80099／kg组血清CHOL水平均显著低于西药组(P0．01)；多肽片段 20099／kg组、西药组、中药组及正常组血清TG水平均显著低于模型组 (氏0．01)，多肽片段40099／kg组、80099／kg组血清TG水平与模型组无 明显差异。 2肝组织病理学检测 病理切片显示，模型组大鼠肝组织中出现大片脂肪空泡，西药对照组 治疗性给