实验六植物组织中总糖和还原糖含量的测定(DNS法)20111017.ppt

实验六、植物组织中总糖和还原性糖含量的测定 1、实验目的 掌握总糖和还原糖含量的测定方法 学习总糖和还原糖提取的方法 2、实验重点和难点 利用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量的实验原理 多糖在酸性加热条件下会降解为还原糖 3、实验原理 3.1、还原糖的概念 指含有游离的半缩醛（酮）基糖。单糖都是还原糖；某些二糖是还原糖（如麦芽糖、乳糖等）；多糖多为非还原糖。 葡萄糖分子中含有游离醛基，果糖分子中含有游离酮基，乳糖和麦芽糖分子中含有游离的醛基，故它们都是还原糖。 3.2、3,5-二硝基水杨酸比色法 总糖的提取及双、多糖的酸水解。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量。 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸(黄色）则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。 由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。 直接滴定法 (改良的兰—爱农法） 高锰酸钾法 萨氏法 3，5—二硝基水杨酸 酚—硫酸法 蒽酮法 半胱氨酸—咔唑法 纸色谱 薄层色谱 GC HPLC β—半乳糖脱氢酶测半乳糖、乳糖 葡萄糖氧化酶测葡萄糖 发酵法 ——测不可发酵糖 重量法——测果胶、纤维素、膳食纤维素 4、操作步骤 4.1、制定标准曲线 4.2、植物组织中总糖与还原糖溶液的获取 (1)还原糖： 4.3、用3,5-二硝基水杨酸法测还原糖、总糖含量 5、数据处理与问题 5.1、计算浓度 5.2、本实验的注意事项？ 预习实验102.1酵母醇脱氢酶的提纯 3,5-二硝基水杨酸法标准曲线 * 相对密度法 折光法 旋光法 物理法 3.3、糖含量测定方法 化学法 还原糖法 碘量法 比色法 色谱法 酶法 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 蒸馏水/mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 葡萄糖浓度/mg/mL A540 沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却至室温 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 DNS试剂/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水/mL 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 标准葡萄糖溶液/mL 5 4 3 2 1 0 管号 30mL水冲研钵2-3次 1g土豆 研成匀浆 3mL水 三角瓶中 50℃水浴0.5h 冷却定到100mL 混匀,过滤 取滤液作为还原糖提取液 (2)总糖： 1g土豆 研成匀浆 3mL水 三角瓶中 沸水浴0.5h 冷却,用NaOH中和,加水定容到100mL 混匀,过滤 取滤液作为总糖提取液 12mL水冲研钵2-3次 10mL6MHCl I2-KI检测 9.0 9.0 9.0 蒸馏水/mL 0 0 1.0 水 A540 沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却至室温 2.0 2.0 2.0 DNS试剂/mL 1.0 1.0 0 样液/mL 总糖样液管 还原糖 样液管 空白对照 管号 * * *