凝胶渗透色谱课件.ppt

B.F.Kenney 凝胶渗透色谱 凝胶渗透色谱的回顾 凝胶渗透色谱的任务 凝胶渗透色谱的原理 凝胶渗透色谱的特点 凝胶渗透色谱的仪器组成 影响凝胶渗透色谱数据置信度的因素 凝胶渗透色谱的发展 １凝胶渗透色谱的简单回顾 凝胶渗透色谱［GPC（Gel Permeation Chromatography）］ 也称作体积排斥色谱[SEC(Size Exclusion Chromatography)]是用溶剂作流动相，流经多孔填料(如多孔硅胶或多孔树脂) 作为分离介质的液相色谱法。 1953年Wheaton和Bauman用多孔离子交换树脂按分子量大小分离了苷、多元醇和其它非离子物质，观察到分子尺寸排除现象。 1959年Porath和Flodin用葡聚糖胶联制成凝胶来分离水溶液中不同分子量的样品。 1962年J.C.Moore将高交联度聚苯乙烯-二乙烯基苯树脂用作柱填料，以连续式高灵敏度的示差折光仪，并以体积计量方式作图，制成了快速且自动化的高聚物分子量及分子量分布的测定仪，从而创立了液相色谱中的凝胶渗透色谱技术。 1 凝胶色谱的任务 聚合物的分子结构 聚合物的各种平均分子量 用GPC测得的不同种平均分子量可对应于其他仪器所测的值： Mn：用渗析计测出(Osmometry) Mw：用光散射计测出(Light Scattering) Mv：用粘度计测出(Viscometry) Mz及Mz+1：用超速离心法测出(Ultracentrifuge) Mw/Mn：为多分散性(Polydispersity) MnMvMwMzMz+1 分子结构与物理性质 分子量的影响，定性关系 分子结构与物理性质 分子量的影响 Mn 与流动性质有关 Mw 与强度性质有关，例如张力及抗冲击力 Mz 与延伸及柔韧性有关 MZ+1 与挤出膨胀(die swell)有关 挤出膨胀发生在材料从模具中挤出时塑料发生膨胀 比较结果 2 凝胶渗透色谱的原理 以多孔树脂为固定相，用溶剂推动分子量大小不同的样品流过固定相产生大小分子顺序流出的分离 流出级份的保留时间（洗脱体积）提供其分子量（尺寸）的信息 用检测器得到各流出组分的强度和流出时间 用已知分子量的标样标定出流出时间和分子量的关系 用标定好的时间和分子量的关系对未知样各流出级份的时间（分子量）和强度进行统计计算得到分子量分布 GPC是如何工作的 各种平均分子量的公式 为GPC加热的理由 使GPC检测处在一个温度稳定的环境 降低流动相黏度，使得谱柱内部溶剂处于接近理想的GPC状态 尽量减轻分子间的弱相互作用（样品分子间、样品和溶剂分子间、填料和样品分子间等） 使难于溶解的样品得以溶解（如聚烯烃PE\PP、工程塑料PPS等） 4 凝胶渗透色谱的特点 实验所需时间可以预知 整个洗脱过程用恒定比例的淋洗液，不能用梯度洗脱 一般情况下试样能溶解就能测定，减少了用于摸索实验条件所需的时间 组分的保留时间提供其分子尺寸的信息 以时间顺序流出的级份进行分级收集就得到了目标分子量的样品可以进一步分析 多检测器集成的 GPC 系统 影响凝胶渗透色谱数据置信度的因素 输液系统的影响 样品制备对结果的影响 进样系统的影响 柱温变化带来的的影响 色谱柱性能带来的的影响 检测器的影响 流动相带来的的影响 样品制备的影响 样品制备的影响 用淋洗液制样，使聚合物在分析的整个过程中处于稳定状态，并且使溶剂峰最小 溶解必须使聚合物链打开成最放松的状态 允许充分的时间让链展开 有些聚合物需要大于3小时 分子量及结晶度愈大，所需真正溶解的时间就俞多 某些结晶的聚合物需要加热 样品制备的影响 样品浓度与分子量相关（分子量越大，浓度越低） 除非该样品可能会有剪切效应发生，聚合物溶液必须过滤 为了增加样品的溶解，可轻微扰动（不要剧烈摇动或用超声） 窄分布标样不必过滤，高分子量标样也不要剧烈摇动 可使用在线过滤器，但是不推荐使用保护柱 样品制备的影响 样品制备的影响 自动进样器 40 瓶位样品盘 2ml 玻璃瓶卷边压紧铝瓶盖 优先进样的样品缓慢搅拌 双温区设计是降解风险降至最低 PL-GPC 50优于分离式系统（检测器） 这是PL-GPC50在室温下设置40°C 时和典型的分离式系统4分钟基线漂移的比较 凝胶渗透色谱的发展 多检测器的应用 快速GPC技术 微流量GPC技术 新型色谱柱技术 多检测器的比较 GPC中的大分子结构形态 大分子的结构形态(支化)可通过粘度理论曲线得到： Log [?] 对 Log M 粘度理论曲线也被称为Mark-Houwink曲线，可由下列方程式描述： Log [?] = Log K + ? Log M K 及 ? 可随 M 变化 GPC中的大分子结构形态 支化降低了大分子的尺寸： 对于同样分子量的大分子