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导致遗传性痉挛性截瘫的突变atlastin-1基因可干扰BMP受体II的转运 摘要 以往研究提示我们：对与骨形态发生蛋白（BMP）有关的信号通路的干扰是导致遗传性痉挛性截瘫（HSP）进行性发展的一个重要因素。已有报道称，可引起HSP的蛋白质，如SPASTIN，SPARTIN和NIPA1可抑制BMP信号通路。我们之前的研究表明，蛋白质NIPA1与ATLASTIN之间存在强烈的相互作用。因此，我们研究了另一种与HSP相关的蛋白——ATLASTIN-1在BMP信号通路中发挥的作用。内源性的表达的ATLASTIN-1表现出一种与BMP受体II（BMPRII）强烈的相互作用；而且对可导致HSP的错义突变R239C和R495W分析后发现BMPRII向细胞膜上的转运被阻断。BMPRII（发挥功能）并不需要atlastin-1的存在，因为将atlastin-1的表达敲低并没有改变内源性BMPRII在胞内的分布。而表达突变型的atlastin-1同样也会干扰BMP信号通路对BMP4分子刺激所作出的反应，并降低磷酸化Smad1/5（P-Smad1/5）分子的水平。我们的结果表明可引起HSP的突变型atlastin-1基因对BMPRII分子的转运表现出了显性负效应，这样就会干扰神经元中的BMP信号通路。综上，再加上我们之前已经证明了的ATLASTIN-1对BMP信号通路的抑制作用，这些结果进一步支持了BMP信号通路在轴突维持及轴突退行性变中所发挥的作用——这一切已经在多种类型的HSP中被观察到了。 关键词 BMP信号通路；Atlastin-1；遗传性痉挛性截瘫（HSP）；BMP受体II（BMPRII）转运 简介 遗传性痉挛性截瘫（HSP）是一组神经退行性疾病，可由于下肢末端的痉挛无力而导致严重的功能丧失。尽管针对与HSP有关的多种蛋白质的功能最近提出了许多学说，但由这些蛋白质的突变类型所导致的不同的和典型性的病理改变的分子机制绝大部分仍然是未知的。HSP的特征是相对孤立的轴索退行性变。有趣的是，尽管HSP的病理特征相对一致，但在目前发现的40多个致病基因中，其致病突变的多样性使其成为了目前为止最具有遗传异质性的神经退行性疾病之一。这也解释了以HSP的发病机理为中心的大量普通生化方法的存在。然而，与HSP相关的哪些基因产物是直接相互作用的，以及这些蛋白的突变类型是如何改变这些相互作用进而产生临床症状的，这些仍然还不清楚。 Atlastin-1基因发生突变是引起早发性常染色体显性（AD）HSP的最常见病因。Atlastin-1蛋白是一种整合膜蛋白，属于大GTP酶发动蛋白超家族。它对管状内质网的形成很重要，而且可导致HSP的突变型Atlastin-1可阻断细管的相互联系。然而，这是否是HSP致病的主要机制仍不清楚。我们之前的结果已经表明，Atlastin-1蛋白还可以强烈地与NIPA1蛋白相互作用，而NIPA1突变可导致另一种类型的常染色体显性（AD）HSP。由NIPA1突变导致轴索退行性变的一种可能的机制是：骨形态发生蛋白（BMP）相关的信号通路受到了抑制。我们假定Atlastin-1蛋白同样可以与BMP通路相互作用——这一点最近在斑马鱼HSP模型中出现过报道。在本研究中，我们联合使用了显微共聚焦、免疫沉淀反应（IP）、流式细胞术和RNA干扰敲低基因表达等技术，最终我们的结果表明内源性的表达的atlastin-1也可以与BMP信号通路相互作用；我们也证明了，与HSP相关的突变型Atlastin-1蛋白可以干扰BMPRII的转运，而且这一干扰表现为一种显性负效应。 结果 Atlastin-1与BMPRII可相互结合，而且导致HSP的突变型Atlastin-1蛋白不改变这种结合作用 我们之前报道过Atlastin-1与NIPA1之间的相互作用，而已知NIPA1是BMP信号通路的一种抑制剂。这提示我们应该检测一下，Atlastin-1蛋白在这一生化通路中是否也发挥作用。我们用之前使用的BMPRII的抗体对取自大鼠脑组织的Atlastin-1和BMPRII进行免疫共沉淀实验，以确定这两种蛋白在体内是否可以相互结合。我们首先证明了BMPRII抗体的特异性——结果可见只有一条带，这与之前的报道也是一致的。而在BMPRII条件性敲除的小鼠中，从其肺部上皮组织中取样进行实验则未见有条带。 对整个大鼠脑组织进行免疫共沉淀实验证明这两种蛋白可形成异源复合物，因为这两种蛋白均可以在另外一种我们推测的结合蛋白存在时被拉下来（图1A1，A2和B）。正如之前所报道的那样，针对BMPRII的抗体及其与Atlastin-1蛋白所进行的免疫共沉淀实验可以观察到130kDa的条带（图1A1）。与之类似的是，我们用BMPRII的抗体进行免疫共沉淀实验来检