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第一章 微生物药物的产生菌 一. 发酵工程常用的菌种 1. 放线菌 链霉菌属 链霉素、四环素、红霉素、卡那霉素等 诺卡氏菌属 利福霉素 小单胞菌属 庆大霉素 2. 细菌 3. 真菌 二. 制药微生物的育种 从微生物菌种保藏机构购买 中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC） 从自然界或现有菌种中分离筛选 对菌种进行改良从而获得新种 2. 微生物双名法 属名在前种名在后 属名和种名均采用斜体拉丁文 属名首字母大写 种名sp.表示未定种或不特指某个种 种名后可加菌株名； 例：枯草芽孢杆菌 Bacillus subtills ATCC 固氮菌Azotobacter sp. 3. 菌种的选育 （1）自然选育 取样 振荡 倍比稀释 涂布 （2）诱变育种 选择出发菌种 同步培养 制备单细胞或单孢子菌悬液 诱变处理 筛选变异菌株 （3）杂交育种 将两个基因型不同的亲株通过杂交遗传物质重新组合，从中筛选出新的遗传型个体的过程。 比诱变育种具有更强的方向性和目的性。 4. 菌种的筛选 （1）随机筛选 摇瓶筛选法 琼脂块筛选法 （2）理性化筛选 快速平皿检测法 野生型 从自然界分离到的任何在其发生营养缺陷型突变 前的原始菌株。 营养缺陷型 指某一野生菌株由于发生基因突变而丧失合成一 种或几种生长因子的能力，因而无法在基本培养 基上正常生长繁殖的变异类型。 基本培养基 指仅能满足某种微生物的野生型菌株生长最低 限度需要的合成培养基。 补充培养基 指在基本培养基中添加某种营养物质，以满足 该种营养缺陷型菌株生长需要的合成或半合成 培养基。 完全培养基 指可以满足某种微生物所有营养缺陷型生长需 要的天然或半合成培养基。 营养缺陷型突变菌株筛选 营养缺陷型突变菌株筛选 影印检出法 实例：营养缺陷型菌株的分离和筛选 抗生素法 常用于细菌和酵母菌营养缺陷型菌株的富集，前者用青霉素法后者用制霉菌素。 （1）将诱变处理后的菌体用完全培养液振荡培养2～3代以结束表型延迟现象，达到稳定的表型和生理状况。 （2）将经完全培养基培养后的菌体进行离心、洗涤，转移到基本培养基中进行饥饿培养4～6h，以消耗从完全培养基中摄取并储存在体内的营养，使其停止生长，防止被以后加入的青霉素杀死。 （3）再转移到含无机氮的培养基中培养3～4h，使野生型细胞刚刚进入对数期，加入一定浓度的青霉素。然后再把培养物移到不含青霉素的低渗溶液中，稀释，涂皿分离。 三. 菌种的保藏 1. 菌种保藏的目的 保持生产性能稳定，不污染，不退化，不死亡 2. 菌种保藏的原理 人工创造条件（如干燥、低温、缺氧、缺乏营养等）使微生物代谢活动处于不活泼状态。 3. 菌种保藏的方法 斜面低温保藏 石蜡封存保藏 固体曲保藏 沙土管保藏 冷冻干燥保藏 液氮低温保藏 四. 菌种的退化和复壮 1. 菌种的退化 菌种的退化现象 2. 菌种的复壮 广义：在菌株生产性能尚未消退前，有意 识的逐步提高菌株生产能力。 狭义：从退化菌种的群体中找出少数尚未 退化的个体，以恢复原有的性状。 总结 发酵工业对微生物菌种的要求： 生长迅速，产量高 容易控制 抗感染 不易退化 不是病原菌 作业 1. 营养缺陷型突变菌株的筛选有哪些方法，具体步骤？ 2. 设计一个实验，用于筛选获得赖氨酸营养缺陷型菌株 3. 以下哪几个微生物的命名符合双名法？ A. Escherichia Coli B. Lactobacillus Bulgaricus C. Azotobacter sp. D. Bacillus subtills ATCC E. Staphyloccus aureus 4. 发酵工业对微生物菌种有什么要求 5. 诱变育种的流程 本章节复习题库 发酵菌种有哪些来源 快速平皿检测法有哪些检测方式 诱变育种的流程 营养缺陷型的定义 野生型的定义 基本培养基的定义 补充培养基的定义 完全培养基的定义 营养缺陷型突变菌株的筛选有哪些方法，具体步骤？ 菌种保藏的目的是什么 什么叫做菌种退化 菌种退化的原因有什么 菌种保藏是通过人工创造什么样的条件使微生物代谢活动处于不活泼状态 什么叫做菌种的复壮 复壮的措施有哪些 发酵工业对微生物菌种有什么要求 庆大霉素由什么属的微生物产生 利福霉素由什么属的微生物产生 链霉素、四环素、红霉素、卡那霉素分别由什么属的微生物产生