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生物技术实验1 天然人a-干扰素肽质量标准指纹图谱的建立 一、实验目的 基因工程产品：重组人a-干扰素的质量鉴定中，肽图是非常重要的指标，为了检测重组干扰素分子内部是否有变异，必须将其肽图与天然人a-干扰素标准肽图进行比较。所以利用网络技术建立天然人a-干扰素标准肽图，具有非常重要的意义。 二、实验原理 对于已知序列的蛋白质，用专一性蛋白酶水解，可以得到完全水解的多肽片段，其每个片段的分子大小也是已知的，而且其分子量的分布反应其一级结构特征。所以可以根据某一蛋白质的肽质量指纹图谱来快速鉴定蛋白质。 三、实验步骤： 1、 访问/ ncbi search protein 输入human interferon， 如下：得到第一个的氨基酸全序列。133 1 hdfgfpqeef dgnqfqkaqa isvlhemiqq tfnlfstkds satwdetlld kfytelyqql 61 ndleacmmqe vgvedtplmn vdsiltvrky fqritlylte kkyspcawev vraeimrsfs 121 lsanlqerlr rke （结果1） 2、访问http://www.expasy.ch/ 找到soft and tool 的full list---other prediction or characterization如下 Peptide cutter 工具: Predicts potential protease and cleavage sites and sites cleaved by chemicals in a given protein sequence 点击进入 输入1得到的全序列， Please, select 选择trypsin为蛋白酶，Please indicate the way you would like the cleavage sites to be displayed 全选，输出结果。再换用另外一种酶pepsin（PH1.3），操作得到结果。 4、 利用excel表格，将输出的结果（肽片段分子质量）按大小排列，保存；（结果2） 5、再次访问http://www.expasy.ch/ 找到soft and tool 的full list---other prediction or characterization ---compute PI/MW.输入结果一得到的氨基酸全序列，得到PI/MW的值，保存备用。 6、再次访问http://www.expasy.ch/ 找到soft and tool 的full list--- Identification and characterization with peptide mass fingerprinting data---Aldente Sample name一栏填入自己的姓名；PI和MW一栏填入上一步操作得到的结果；peak list填入结果二得到的按照大小排列的数值，注意要去掉重复数值；Predefined Taxon选择Homo sapiens；Enzyme选择与peak list对应的酶；missed cleavage选择0；在最后的Email address 输入自己的邮箱。提交之后会提示结果已经反馈到自己的邮箱。打开邮箱查收来自expasy的邮件，得到结果3 四、思考题 如果更换蛋白酶，天然人a-干扰素标准肽图有何变化？ 五、实验感想 网络实验对于生物技术制药专业课程有何益处？ 如何利用？