5_氮杂_2’_脱氧胞苷对内皮祖细胞分化的影响及机制研究刘加远.docVIP

5_氮杂_2’_脱氧胞苷对内皮祖细胞分化的影响及机制研究刘加远 　　[摘要]目的探讨5_氮杂_2’_脱氧胞苷诱导内皮祖细胞分化为内皮细胞的作用及初步机制研究。方法收集脐带血，Ficoll_Paque淋巴细胞分离液和6%羟乙基淀粉沉降法分离获得单核细胞并培养，采用免疫组化及倒置相差显微镜鉴定细胞为内皮祖细胞（EPCs），EPCs培养7d后，分别加入1μmol/L（即dC1组），3μmol/L（即dC2组）5_Aza_dC的培养液，阴性组为采用00076%DMSO进行干预。流式细胞术检测5_Aza_dC处理后第0、3、7d后CD34+、CD31+的表达，RT_PCR分析VE_cadherin、Tie_2及vWF基因表达，western blotting检测vWF蛋白表达，MSP法检测BMP4基因CpG岛甲基化表达情况。结果①单核细胞经倒置相差显微镜及VE_cadherin、Tie_2、vWF、KDR、CD34及CD133等因子证实为EPCs；②流式细胞术结果显示，dC2组在经5_Aza_dC处理后的第3d、第7d CD34+（分别为302%、67%）降低，同阴性组（467%、408%）比较差异具有统计学意义（均P005）；dC2组在经5_Aza_dC处理后的第7d C CD31+（479%）升高，同阴性组（313%）比较差异具有统计学意义（P005）；③RT_PCR结果显示，dC2组在处理后第14d Tie_2、VE_cadherin基因均明显高于阴性组（均P005）；dC1、dC2组在处理后的第3d、第7d、第14d Tie_2、vWF、VE_cadherin基因均明显高于处理后的第0d（均P005）；④Western blotting检测显示，dC2组第0d、第3d、第7d vWF蛋白表达量均高于阴性组（均P005）；dC1、dC2组在第3d、第7d vWF蛋白表达量均高于所对应组别的第0d vWF蛋白表达量（均P005）；⑤甲基化处理后dC1组和dC2组BMP4呈低表达，而非甲基化时dC1组和dC2组BMP4呈强表达。结论5_Aza_dC具有定向且快速诱导EPCs分化为内皮细胞的可能，这一作用机制可能与促进BMP4分化基因表达，进而刺激Tie_2、VE_cadherin及vWF的表达的作用有关。 　　[关键词]5_氮杂_2’_脱氧胞苷；内皮祖细胞；分化；内皮细胞 　　中图分类号：R392文献标识码：A文章编号：1009_816X（2016）02_0086_05 　　doi：103969/jissn1009_816ffects and Mechanism of 5_aza_2_deoxycytidine on the Differentiation of Endothelial Progenitor Cells. LIU Jia_yuan， YANG Guo_yuan， YANG Zhi_jun， et al BAYI Brain Affiliated Hospital of General Hospital of Beijing Military Region， Beijing 100070， China 　　[Abstract] Objective To investigate the effects and mechanism of 5_aza_2_deoxycytidine induce endothelial progenitor cells to differentiate into endothelial cells Methods mononuclear cells were separated from umbilical cord blood， using Ficoll_Paque lymphocyte separation medium and 6% hydroxyethyl starch sedimentation， which were cultured and differentiate into endothelial progenitor cells （EPCs） The EPCs were identified using immunohistochemistry and inverted phase contrast microscope After 7 days， 1μmol/L （ie dC1 group） or 3μmol/L （ie dC2 group） of 5_Aza_dC was added 00076% DMSO was used as intervention in the negative group CD34+， CD31+ exp