武汉东康源高效液相谱法测定饲料中磺胺喹恶啉方法研究.DKY.docVIP

武汉东康源科技实验室为您提供本方法提取操作简便、快捷，通过上述实验考查。此色谱条件下，分辨率高，干扰少，适用于配合饲料、浓缩料及添加剂预混合饲料中磺胺喹恶啉的测定。方法最小检出浓度满足实际监督检测需要，具有较好的准确度及精密度。 高效液相色谱法测定饲料中磺胺喹恶啉方法研究 广泛用于养禽业，磺胺喹恶啉属磺胺类抗生素兼有抗球虫作用。其口服后吸收迅速，但排泄缓慢，残留在组织器官及鸡蛋中时间长，人食用后，对人体发生耐药性等副作用。世界卫生组织（WHO规定动物组织、奶的最高残留限量（MRL值为100μg/kg日本等国规定肉鸡中不得检出。因此，该药的使用应严格控制用药期及用药量，以保证产品的平安及对外贸易疏通。 磺胺喹恶啉纯品为黄色粉末，据英国兽药典记载。几乎无味，不溶于水，溶于甲醇、乙醇，易溶于碱性溶液。目前，饲料中磺胺喹恶啉的检测方法美国AOA C规范是采用分光光度法，该法要求含阿散酸及不含阿散酸的饲料采用两种不同的测定方法。而国内饲料目前添加组分较复杂，检测者对饲料情况是未知的难以确定用哪一个方法；且该方法中需要重氮化试剂做偶合反应，其毒性大，对操作者及环境 都会造成危害。因此，没有采用该法。另外，还有文献报道用气相色谱法测定，中间仍需重氮化衍生。最终选用高效液相色谱法。 1.测定方法 离心，过滤，HPLC仪上分离,1.1原理 用甲醇水溶液提取饲料中的磺胺喹恶啉。紫外检测器240nm处测定。 1.2试剂和溶液 除特别注明外均为分析纯试剂；水为蒸馏水，以下所用的试剂。色谱用水符合GB/T6682规定的一级水。 1.2.1磺胺喹恶啉标准品：含磺胺喹恶啉（C14H12N4O2S95.0％。 1.2.2甲醇：色谱纯。 1.2.3磷酸盐溶液：取磷酸二氢钾3.40g和磷酸氢二钾5.71g加水溶解并稀释至1000mL 置4℃冰箱中避光保存，1.2.4磺胺喹恶啉标准溶液：准确称取磺胺喹恶啉（4.150mg溶于甲醇并稀释成0.1mg/mL贮藏液。有效期1个月。临用前，取此贮藏液用水稀释成适当浓度的规范工作液。 1.2.5提取液：甲醇100mL＋水50mL 1.3仪器 1.3.1实验室常用仪器设备 1.3.2高效液相色谱仪（配紫外检测器） 1.3.3分析天平：感量为0.0001g和0.001g 1.3.4旋涡振荡器 1.3.5离心机：4000r/min 1.3.6针头过滤器：备孔径为0.45μm微孔滤膜 1.4分析方法 1.4.1提取 精确至0.001g加入提取液（4.550mL旋涡振荡器混匀，称取5g试样。超声水浴中提取15min中间取出摇动1次，然后4000r/min离心5min静置，取上清液过0.45μm滤膜，供液相色谱测定。 1.4.2规范曲线的制备 用水或流动相稀释成浓度分别为0.100.501.002.0010.0μg/mL磺胺喹恶啉标准溶液，准确吸取贮藏液适量。做出规范曲线。 1.4.3测定 1.4.3.1色谱条件 色谱柱：C18柱 柱长150mm柱内径4.6mm粒度5μm或性能相当者。 并超声脱气。流动相：磷酸盐溶液75mL＋甲醇25mL用前过0.45μm滤膜。 流速：1mL/min 检测波长：240nm 进样量：1020μL 1.4.3.2定性与定量 定量由规范曲线或单点校准。根据规范品的保管时间定性。 1.4.4结果的计算 每千克试样中含磺胺喹恶啉的质量按下式公式计算： m1 x=D m x每千克试样中磺胺喹恶啉的质量（mg m1拖尾峰(tailing peak)。前者少见。色谱峰面积对应的磺胺喹恶啉的质量（μg D稀释倍数； m所称样品的质量（g 保管至小数点后1位。平行测定结果用算术平均值表示。 2.结果与讨论 2.1色谱条件的确定 而磺胺喹恶啉在该体系下出峰时间是56min影响检测效率。改用磷酸盐/甲醇体系做流动相。大多数磺胺类药物常以磷酸/乙腈体系做为流动相。 磺胺喹恶啉的保管时间发生了变化。通过改变磷酸盐和甲醇的比例。 磷酸盐 :甲醇 磺胺喹恶啉保留时间 min 70:304.86 75:257.80 80:2012.32 出峰晚影响检测效率，出峰早磺胺喹恶啉与杂质峰相互干扰。峰形变宽。磷酸盐与甲醇比例75:25较为合适。 2.2方法线性与最小检出限 对5.010.020.0100.0mg/kg添加浓度按上述方法测定。 添加浓度（mg/kg5.010.020.0100.0 基线构成之面积称峰面积。A＝×σ×h＝2.507σh＝1.064 Wh/2h峰面积 3590671684122536771414