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亲和层析实验相关操作示图 生物教研室 - 朱超锋 - 2013/4/8 物品介绍 蠕动泵 硅胶管 层析柱 推杆 筛板 铁丝 筛板的装入 筛板的作用 层析柱进行使用时，需使用两块筛板 层析柱的底部放置一块，作用是：截留填料，而溶液能通过筛板流出。 填料的上方再放置一块筛板，作用是：防止填料上方加入的溶液直接冲击填料床面（柱床），避免将床面冲散。 填料被封装在两块筛板之间。（注意：上筛板和填料的上端刚好相接触，但不挤压填料） 下筛板 填料 上筛板 缓冲液 筛板的装入 1.用纯水润湿筛板 2.筛板放置于推杆上 3.将推杆推入柱子内 4.完成下筛板的装入 下筛板 蠕动泵卡片的装卸 卡片的作用 卡片将硅胶管固定并挤压在泵头上，泵头转动从而对硅胶管产生一个规律的脉冲性挤压，控制硅胶管内溶液的流动 蠕动泵泵头上有两个卡片，一个卡片可固定一根硅胶管，因此蠕动泵最多可同时驱动两根硅胶管溶液的流动。 （注意：当只驱动一根硅胶管时，需将固定有硅胶管的卡片放置在泵头朝内侧；空卡片放置在泵头外侧） 卡片右上角有调节棘轮：调节软管与滚轴的紧密程度。棘轮上提，压紧硅胶管；下放，则放松。（注意：紧密度应适中，太松则硅胶管漏液，太紧则对硅胶管造成损坏） 调节棘轮 扳机 泵头 外侧 内侧 卡片 蠕动泵卡片的装卸 1.卸前状态 2.大拇指往下压扳机 3.另一只手扶住卡片顶端 防止卡片弹射出去 4.完成卡片的卸出 蠕动泵卡片的装卸 1.将硅胶管上的管卡卡在卡片上 2.将管套入内部 3.将卡片U口放入固定柱 4.U口卡入固定柱 固定柱 卡片U口 蠕动泵卡片的装卸 5.用力往下压卡片 6.卡片装入泵头 7.将硅胶管连接到层析柱 8.层析柱垂直固定好 调节棘轮-试漏（泵未开启！） 1.往柱子内装纯水 2.未调节棘轮 3.将棘轮往上提1卡 4.继续往上提棘轮 泵未开启，因为管未被调节棘轮挤压，水会因重力作用，从另一端流出 管虽受挤压，但还有缝隙，水依然会因重力作用，从另一端流出 直至挤压合适时，缝隙被封闭，水不再流出（3分钟内） 调节蠕动泵转向 泵面板显示数值为泵头转速，非管内溶液流速。 流速需手动接水测定。 泵开启，转头逆时针转动时，水流方向是从右到左 水流方向不对时，请按面板的转向按钮，改变泵头转动方向 填料装柱 1.装平衡液 2.装填料 3.将上筛板放入 把准备好的填料，转入柱子。填料自然沉降。直至沉降完成（床面需平整，不平整可用玻璃棒搅拌填料让其重新沉降） 用玻璃棒将上筛板倾斜或垂直放入置于平衡液液面下方 再用玻璃棒将上筛板方向转至大概水平 调整好蠕动泵后，关闭蠕动泵，往柱子内约1/4 高度的亲和柱平衡液 4.将上筛板放入 填料装柱 将筛板推至刚好与填料上表面接触（不要挤压填料！！！） 用推杆将上筛板往下推（筛板下方应该没有气泡，若有请用玻璃将筛板弄至垂直赶走气泡后，再重复以上操作） 5 6 上样示意图（示意图两筛板间没装填料，仅为示意图） 用移液管将粗酶液加入（移液管尖端靠近筛板，并在筛板中间） 平衡好后并调节好流速，上样前，需将上筛板以上的平衡液排空至液面刚好和筛板相切，关闭蠕动泵（可用泵抽走，若量较多，可用移液管从上方吸走） 1.上样前排液 2 上样后，开启蠕动泵，并进行收集。 当粗酶全部进入填料后（粗酶液面和筛板相切），关闭蠕动泵，往柱子内加入一定量平衡液后，再开启蠕动泵，继续收集 卸出筛板（实验结束后） 1 2 3 倒去填料后，将柱子下端接到水龙头的橡胶管上，用急水流一冲 用镊子或玻璃棒压一下筛板的一边，将其一个边缘朝上 用镊子将上筛板夹出 4 再用镊子取出下筛板 将两个筛板归还给老师 下筛板被冲歪 5 * *