《分子生物学教学课件》5年制第1章蛋白质.pptVIP

2. 紫外吸收 肽 键 肽平面(peptide plane) Summary 镰刀形红细胞贫血（sickle cell anemia） 蛋白质的变性与复性 一、透析(dialysis) 二、层析(chromatography) 离子交换层析 凝胶过滤 亲和层析 离子交换层析(ion exchange chromatography) 固定相－离子交换树脂 阳离子～：酸性基团，带负电，交换阳离子 阴离子～：碱性基团，带正电，交换阴离子 原理：蛋白质所带电荷的性质和数量 凝胶过滤(gel filtration) 固定相：凝胶颗粒－多孔性的网络结构 原理：蛋白质分子大小不同（反筛效应） 三、超速离心(ultracentrifugation) 原理：蛋白质密度不同 沉降系数(sedimentation coefficient, S)： 与蛋白质密度和形状有关 球状蛋白质，S与分子量成正比 5. 影响二级结构形成的因素 # 蛋白质的二级结构是根据其一级结构的特点而决定的, 但在同一个蛋白质多肽链中的不同区域,可形成不同的二级结构。 蛋白质二级结构是以一级结构为基础的 影响二级结构形成的因素主要为残基侧链的大小、电荷 脯氨酸的存在影响α-螺旋的形成 分子伴侣(chaperon) 1. 概念 是指一条多肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置，亦即肽链上所有原子或基团的空间排布。 2. 结构域与三级结构 结构域是指二级结构折叠比较紧密的区域，每个结构域都有自己独立的功能。 结构域通常是蛋白质的活性区域 3. 三级结构的维系力——次级键 包括疏水作用、离子键(盐键)、氢键及Van der Waals力等 三、蛋白质的三级结构 (tertiary structure) Model of myoglobin at high resolution Diagram of binding domain of fibronectin Alpha-carbon diagram of α-chymotrypsin Model of ribonuclease S 1. 概念 由两条或多条的肽链之间相互作用，彼此以非共价键相连而成的更复杂的空间排布。 2. 组成单位: 亚基 (subunit) 数量: 2～几千个 2～10, 寡聚体 10, 多聚体 亚基有自己独立的一、二、三级结构，但无完整的功能 亚基可以相同——均一四级结构 亚基亦可不相同——非均一四级结构 四、蛋白质的四级结构 (quaternary structure) 3. 主要维系力：疏水作用 第三节. 蛋白质结构与功能的关系 Section 3. Relationships between structure and functions of protein 一、蛋白质一级结构与功能的关系 (primary structure function) 一级结构一旦确定，就决定了其空间结构的排布 但一级结构并不是决定空间结构的唯一因素 (一). 一级结构是空间结构的基础 (二). 一级结构与功能的关系 1.不同的一级结构决定不同的生理功能 2. 一级结构中只有少数氨基酸残基与功能直接相关, 即功能基团, 或称关键部位(key - part) 3. 非功能基团对维持功能基团的构象有重要作用 关键部位相同，则功能可能相同或相似。如Insulin,Cyt c 关键部位不同，即便是一个氨基酸残基的改变，也可导致功能的完全改变或丧失. 如镰刀型血红蛋白 镰刀形血红蛋白 在HbS中，由于带负电的极性亲水谷氨酸被不带电的非极性疏水缬氨酸所代替，致使血红蛋白的溶解度下降。在氧张力低的毛细血管区，HbS形成管状凝胶结构(如棒状结构)，导致红细胞扭曲成镰刀状(即镰变)。这种僵硬的镰状红细胞不能通过毛细血管，加上HbS的凝胶化使血液的黏滞度增大，阻塞毛细血管,引起局部组织器官缺血缺氧，产生脾肿大、胸腹疼痛(又叫做“镰形细胞痛性危象”)等临床表现。 往往会阻塞毛细血管，进一步导致疼痛、中风、心脏病发作、肾功能丧失、甚至早夭。 Differences in amino acids sequence of insulin from human and animals. Insulin A8 A9 A10 B30 human Thr Ser Ile Thr pi