水处理-层析分离讲解.ppt

层析分离 知识点：色层分离法的分类及其概念，柱层析技术，吸附层析技术，离交层析技术，生物亲和层析技术，分配层析技术，凝胶过滤技术，电泳技术，薄板层析技术。 重点：上述各技术的原理、操作方式、操作过程、所用装置和材料的选择、适用范围，能够灵活熟练地运用这些技术。 难点：常用层析法的分类及其合理选用。 目　录　 1 层析法概述 2 柱层析 3 纸层析 4 薄层层析 5 吸附层析 6 分配层析 7 凝胶过滤 8 电泳法 9 毛细管电泳 10高效液相色谱 1 层析法概述 1.1　引言 1.2　层析的发展史 1.3　层析的基本原理及基本概念 1.4　层析的分类 1.5　层析剂 1.1 引言 层析原理 色谱（层析）法应用范围 色谱技术的提出 色谱分离图示 1.2 层析的发展史 1.3 层析基本概念 层析 展开（development） 洗脱液 eluate 色谱 Chromatograph 。 分配系数 洗脱体积： 外体积： 内体积 ： 正相层析： 反相层析： 1.4 层析分类 吸附色谱与其它色谱法的异同点 1.4 层析的分类 ⑴根据溶质分子与固定相相互作用的机理不同的分类 ⑵ 根据实验技术的分类 ⑶ 根据固定相的形状不同的分类： ⑷ 根据流动相的物态不同的分类 ⑸ 操作方式不同的分类 1.5 层析剂种类 2 柱层析法 柱色谱法对色谱介质材料的要求 常用柱色谱介质的分类 柱层析系统的组成 柱色谱洗脱方法 常用柱色谱介质的分类 无机物色谱介质包括：氧化铝、硅胶、活性炭、膨润土、磷酸钙 凝胶型和晶型 、氧化钛和氢氧化锌凝胶等。 聚合物色谱介质有：琼脂糖、葡聚糖、纤维素和聚丙烯酰胺等。 柱色谱洗脱方法 洗脱一般有三种方法： ①恒定洗脱法： ②逐次洗脱法： ③梯度洗脱法： 梯度洗脱法是目前最常用的洗脱法。 浓度梯度制造器 柱色谱系统的组成 色谱介质有各种各样，但柱式色谱系统的组成基本相似，一般由蠕动泵、色谱柱、检测器、记录仪以及部分收集器等几个部分构成 图2 。 柱层析系统的组成 柱式层析系统的组成基本相似。由以下几个部分构成： A 蠕动泵 B 层析柱 C 装柱 D 加试样 E 洗脱 F 检测器 G 部分收集器 柱层析装置图 3 纸层析法 3.1 基本原理 3.2 操作方法 3.3 操作步骤 小实验 当滤纸接触到溶剂时，溶液将上升。 滤纸上的小圆点是4种不同的氨基酸的混合物。 看看接下来会发生什么事情… 可以看出1号氨基酸上升的最高，在滤纸上跑得最快。 而4号氨基酸与滤纸的结合最紧，因此跑的速度比其他的氨基酸慢。 这就是纸层析法。 对照上图，可知道1-4号的各代表什么氨基酸。 纸层析法是分离鉴定蛋白质的氨基酸组成的重要工具。 一 原理 滤纸一般能吸收22%-25%的水,其中6%-7%的水是以氢键与滤纸纤维上的羟基结合,一般情况下较难脱去. 纸上层析实际上是以滤纸纤维的结合水为固定相,而以有机溶剂 与水不相混溶或部分混溶 作为流动相.展开时,有机溶剂在滤纸上流动,样品中各物质在两相之间不断地进行分配.由于各物质有不同的分配系数,移动速度因此不同,从而达到分离的目的. 溶质在滤纸上移动的速率可用Rf值表示: Rf a/ b式中a:溶质斑点中心的移动距离 b:溶剂前沿移动的距离 二 影响Rf值的主要因素 Rf值决定于被分离物质在两相间的分配系数以及两相间的体积比. 由于在同一实验条件下,两相体积比是一常数,所以Rf值决定于分配系数.不同物质的分配系数不同,Rf值也不相同,由此可以根据Rf值的大小对物质进行定性分析.  二 影响Rf值的主要因素 1. 物质的结构和极性 物质的结构和分子极性是影响Rf值的主要因素.极性较大的物质,在水中的溶解度较大,其Rf值就较小,反之亦然. 2. 滤纸 不同滤纸的厚薄程度和纤维松紧度各不相同,因此结合的水量不一样,两相的体积比也就不同.所以同一种物质在不同型号的滤纸上进行层析时,所得到的Rf值也不相同. 此外,滤纸上所含的杂质也会影响Rf值,必要时要进行预处理,以去除杂质的影响.例如:可用0.01-0.4mol/L的HCl处理滤纸,以除去滤纸上的金属离子,然后再用水洗至中性. 层析滤纸由高纯度的棉花制成.要求质地均一,厚薄一致,纤维松紧度适中,具有一定的机械强度,并具有一定的纯度.国产新华滤纸,日本东洋滤纸等均经常被采用. 3.层析所用的溶剂 一物质在不同的溶剂系统中进行层析时,Rf值不同.所以溶剂的配制和使用必须严格,才能使Rf值的重现性好.在好的溶剂系统中被分离物质的Rf值应在0.05-0.85之间,样品中被分离组分的Rf之差最好大于0.05. 溶剂系统中的试剂若纯度不够,需经过预