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猪流行性腹泻预防及诊断研究进展 　　摘要：猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的猪的一种高度接触性肠道传染病，近几年PED的流行特点和发病情况发生很大的变化，给防治工作带来了许多困难，对养猪业造成巨大的经济损失。本文从猪流行性腹泻的疫苗免疫和实验室诊断两个方面进行综述，为猪流行性腹泻的防控提供参考。 　　关键词：猪流行性腹泻；疫苗免疫；实验室诊断 　　中图分类号：S858.31 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2014）09-0084-03 　　猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的猪的一种高度接触性肠道传染病，以呕吐、腹泻和食欲下降为基本特征。各种年龄的猪均易感[1]，但对哺乳仔猪、架子猪或育肥猪的危害更大，尤其是哺乳仔猪危害最为严重。该病自1971年在英国首先报道了PEDV的发生，相继在比利时、德国、瑞士、日本等许多国家报道了本病的发生[2]。1973年，类猪传染性胃肠炎的急性腹泻首先在我国上海发生，但是直到1984年，才经荧光抗体试验和血清中和试验证实该病的病原是PEDV[3]。到目前为止，我国已有24个省报道了PED的发生和流行情况[4]。PED主要发生在冬春季节，病毒主要通过感染猪的粪便而传播，自然感染病例大多是经口摄入而感染，粪―口途径是该病的主要传播途径[5]。PEDV感染2周龄仔猪引起呕吐、腹泻、脱水为特征的急性肠道传染病，死亡率高达100%，对世界范围内的养猪业均造成极大的威胁。随着如今集约化、规模化养殖的发展，给该病的传播创造了有利条件。疫苗免疫是猪流行性腹泻免疫预防的主要手段，而由于该病的流行病学和临床症状方面与猪传染性胃肠炎无显著差别，因此必须借助于实验室检查方法才能确诊。本文从该病疫苗预防和实验室诊断两方面介绍猪流行性腹泻的预防和诊断的研究情况。 　　1 PED疫苗的研究 　　1.1 PED组织灭活苗 　　PEDV的沪毒株（S株）接种3～9日龄仔猪，待典型发病后采集病猪小肠组织及内容物，制备PED氢氧化铝灭活苗，该疫苗经后海穴注射，对仔猪的主动保护率为85%，被动保护率为97.06%。接种后2周开始产生免疫力，免疫期可达6个月[6]。 　　1.2 PED细胞灭活苗 　　由于组织灭活苗存在操作繁琐、生产成本高及质量难以控制等缺点，因此采用在病毒培养液中加适量胰酶的培养方法，将PEDV CV777适应于Vero细胞，以2代毒制备氢氧化铝灭活苗，后海穴接种对仔猪的主动免疫保护率为85.19%被动免疫保护率为85%[7]。通过该方法制备的PED细胞灭活苗可用于现在PEDV的预防与控制。 　　灭活疫苗具有安全、稳定的优点，但同时具有需要大剂量接种或者应用浓缩抗原；免疫期短常需强化接种；不能引起局部免疫，以致细胞免疫的作用弱；产生完全免疫力需要2周；不利于紧急预防接种与降低疫苗费用等缺点。 　　1.3 PED弱毒苗 　　目前，PED的商品化弱毒疫苗主要有我国的CV777株，日本的P-5V株和韩国的KPED-9株、DR13株。中国农业科学院哈尔滨兽医研究所研究将适应Vero细胞的CV777株从90代起进行克隆纯化，克隆后的弱毒株仍保持良好的安全性，主动免疫与被动免疫的保护率分别达到95.92%及96.2%。稳定性试验经6代次的返祖传代仍是稳定的，未见毒力返强[8]。日本的P-5V株虽然没有连续传代致弱的相关报道，却在日本和韩国用于PED的预防。韩国的KPED-9是由从新生仔猪分离的KPEDV-9通过Vero细胞连续传代93代后制备而成的；DR13是由从患病仔猪小肠内容物分离的DR13强毒通过Vero细胞连续传代而成，该疫苗是韩国用于预防PED的口服疫苗。 　　1.4 转基因植物疫苗 　　转基因植物作为口服疫苗有可能产生理想的黏膜免疫反应，从而达到预防病毒性腹泻病的目的。Yang等[9]将PEDV的S基因转入烟草中，提取转基因植物蛋白给小鼠注射，证明其具有免疫原性。给小鼠饲喂这种转基因植物可诱导小鼠产生全身免疫和黏膜免疫。Yang等[10]相继应用脓杆菌介导的蛋白转入法将PEDV的S基因的主要抗原位点（命名为K-COE）和合成的PEDV中和抗原表位在烟草中表达。这些研究为研制PEDV口服转基因植物疫苗提供了新的思路。目前，在以烟草花叶病毒为载体的无烟碱烟草植物中PEDV的S蛋白中和表位得到了成功表达，用表达蛋白免疫接种后，对仔猪具有良好的保护作用，为PEDV转基因植物疫苗的研究奠定了基础。植物的多种优越性均可被用于研究转基因疫苗，并且已经取得了很大的进展。但仍有一些障碍必须克服，如蛋白在植物中的表达水平低、表达产物在植物中的稳定性差、转基因口服疫苗在产生免疫反应之前在胃肠道内有时被消