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Western Blot 【实验原理】： Western Blot 印迹方法，又称为免疫印记，是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，对不同分子量的蛋白质进行分离，并通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印至固相支持物（NC膜或PVDF 膜）上，用抗靶蛋白的非标记抗体（一抗）与转印后膜上的靶蛋白进行特异性结合，再与经辣根过氧化物酶标记（偶联）的二抗结合，最后用ECL超敏发光液试剂检测。如果转印膜上含有靶蛋白，经X 光片曝光、 显影后，则会在X-光片上出现特异性蛋白条带。 Western blot 实验分为三个部分： 1． 样品蛋白质的制备、 蛋白质含量测定 2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 3． 凝胶转膜及其检测 以提取细胞蛋白为例Western 印记杂交实验流程图： 提取细胞总蛋白、测定含量 ↓ 制备SDS胶 ↓ 蛋白样品变性、电泳 ↓ 电泳转膜 ↓ 封闭 ↓ 一抗 ↓ TBST 洗涤 ↓ HRP 标记的二抗 ↓ TBST 洗涤 ↓ ECL 试剂作用 ↓ X-光片曝光、显影 ↓ 结果分析 细胞总蛋白的提取及含量测定 一、细胞总蛋白的提取 提取细胞蛋白多是利用将细胞裂解、破碎、使蛋白质释放的原理。提取蛋白质的方法很 多。其目的都是要获取高丰度、高品质的蛋白质,以满足实验需要。 在提取蛋白质实验中要特别考虑到细胞裂解液的pH、去污剂的