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Western blot 免疫印迹 原理:抗原抗体的反应. 先将蛋白通过SDS电泳分离开来，然后再利用电场力的作用将胶上的蛋白转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜(nitrocellulose filter membrane，简称NC膜）上，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，用相应抗体作为一抗进行检测，形成抗原抗体复合物, 再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。一抗和二抗可以理解为“探针”。 SDS电泳：依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。 分离胶和浓缩胶的区别在于Tris-Cl的PH值不一样 过程： 清洗玻璃板：（可加洗衣粉），烘箱烘干 固定于电泳槽上 配置分离胶：加入TEMED后迅速灌胶，留出灌注浓缩胶所需空间（梳子的齿长再加1cm），上部用无水乙醇封面，加无水乙醇液封时要很慢很慢，否则胶会被冲变型。）分离胶所用的浓度范围：5％的凝胶可用于60～200kDa的SDS变性蛋白质分子的分离，10％用于16～70kDa，15％用于12～45kDa。若要加速凝胶，可加双倍的TEMED，或增加10％过硫酸胺（AP）的量 配置浓缩胶：分离胶完全聚合后（约15min）,倾出覆盖层液（无水乙醇），用吸水纸吸干残留液体，加入浓缩胶后，迅速插入梳子，避免气泡产生，待凝胶完全聚合（约15min）。 电泳：将配好的玻璃板放放入电泳槽