YPD 培养基.docVIP

YPD 培养基 液体150 ml; 两瓶50 ml, 5个试管，每管5 ml, 蒸馏水 40%甘油（用生理盐水配制） YPD培养基： 1% Yeast Extract（酵母膏） ，2% Peptone（蛋白胨） ，2% Dextrose glucose （葡萄糖），若制固体培养基，加入2%琼脂粉 YNB固体培养基：YNB培养基（w/v）：YNB 0.17%，（NH4）2SO4 0.5% 1%，MSM培养基（mg/L）：Na2HPO4 1 000， KH2PO4 500， CaCl2 30， MgSO4?7H2O 70， FeSO4?7H2O 30， KI 0.83， H3BO3 6.2， MnSO?44H2O 22.3， ZnSO4?7H2O 8.6， Na2MoO4?2H2O 0.25， CuSO4?5H2O 0.025， CoCl2 0.025， at pH 8.0牛奶-双层平板：A：4 %的牛奶；B：4 %的琼脂；C：固体培养基。将灭菌的A，B两种培养基组分混合，倒入平板，待培养基凝固后倒入固体培养基，制成牛奶-双层平板。0.2M醋酸-醋酸钠缓冲液 pH 5.6 0.2M NaHAc 91.0mL 0.2M HAc 9.0mL 1.0 M的HCl 0.1℅的刚果红染液将0.1g刚果红溶于100mL蒸馏水中，配成0.1％的刚果红染液。 筛选培养基 w/v ：CMC 0.6％，蛋白胨1.0％，酵母粉0.5％，KH2PO4 0.1％,MgSO4·7H2O 0.02％,琼脂2.0％，配制，参照 叶姜瑜,1977 方法，并略有改动。发酵基础培养基 w/v ：CMC 1.0%，蛋白胨 0.5%，酵母粉0.5％，配制。CMC 1.0%，蛋白胨 0.5%，酵母粉0.5％，配制。产纤维素酶菌株的初筛 挑取单菌落点种在筛选培养基平板上 ，再培养d，用0.1℅的刚果红染液覆盖30 min，然后用自来水冲洗，再用1.0 M的HCl覆盖，后用自来水冲洗，观察形成水解圈的情况。通过筛选平板的初步筛选，从本实验室海洋酵母菌种库中的300余株海洋酵母菌中筛选得到19株能产生透明圈的菌株。透明圈见图2-1，从图2-4结果可以看出，19株可以产生透明圈的海洋酵母菌中，菌株98、3、G7b、G10a、146产生的透明圈和菌落直径的比值（D/d）较大，可以初步推断这五株海洋酵母菌产生的纤维素酶酶活较高。 图2-1 19株海洋酵母在筛选培养基平板上产生水解圈情况