大豆卵磷脂取代卵黄对猪精液低温保存的影响.docVIP

大豆卵磷脂取代卵黄对猪精液低温保存的影响 　　摘要：为了进一步优化猪精液低温保存稀释液配方，用不同浓度（1.50%、3.00%、4.50%）的大豆卵磷脂取代稀释液中的卵黄，进行猪精液低温保存试验。结果表明，以卵磷脂完全取代猪精液低温保存稀释液中的卵黄时，300%、1.50%浓度组与含20.00%卵黄的常用稀释液保存效果相当（3%：P0.05，1.5%：P0.01），其中含150%卵磷脂的稀释液保存效果最好。 　　关键词：猪；精液；低温保存；大豆卵磷脂 　　中图分类号：S828.3+4文献标识码：A文章编号：1003-4374（2013）01-0036-03 　　卵磷脂（Phosphatidyl choline， PC） 在医学上具有延缓衰老、保护肝脏、健脑益智和预防心血管疾病等多方面的作用。近年来，无动物性成分精液稀释液的研究已逐渐成熟，并取得了良好的效果。在国外，以PC取代卵黄或奶类配制牛精液冷冻稀释液已经实现商业化，且正在逐步取代传统的冷冻稀释液。在国内，这项研究也取得了一定的进展[1，2]。但是，目前猪精液低温保存技术尚未实现商业化，也没有PC在猪精液低温保存方面应用的研究报道。 　　1材料与方法 　　1.1主要仪器设备及试剂 　　电子冷暖箱（北京福意联电器有限公司），相差显微镜（OLYMPUSCH3_DO 6M01434， Japan），大豆PC（武汉华怡达化工有限公司）。 　　1.2试验动物 　　广西科达畜禽改良有限责任公司种猪场健康、正常采精的种公猪。 　　1.3试验方法 　　1.3.1采精 采用手握法采集公猪精液，每次采得的猪精液用四层脱脂纱布过滤，去除胶状物，同时检查原精品质，精子活力0.75以上，气味、色泽正常者供稀释保存用。 　　1.3.3精液品质检查 在检测精子活力（直线运动的精子占视野中精子的百分率）的同时，记录精子有效存活时间（精子活力为0.4的保存时间）和总存活时间（精子全部死亡的保存时间），并计算存活指数∑[（上次活力+下次活力）/2×时间间隔]。 　　1.4试验设计及数据处理 　　试验共分4个组，对照组的稀释液为葡萄糖-蔗糖-卵黄液（表1-1），试验组1-3的稀释液在对照组的基础上，用不同浓度（1.50%、3.00%、4.50%）的大豆卵磷脂取代对照组中的20.00%的卵黄。试验重复6次。 　　试验所得的各组数据均以Mean±SD表示，采用SPSS 17.0软件进行方差分析检验各组之间差异的显著性。 　　2结果 　　从表2-1可以看出，各试验组精子稀释后活力与对照组相比差异不显著（P0.05），1.5%、3%浓度组一定程度上还延长了精子的有效保存时间，但差异不显著（P0.05），而4.5%浓度组有效存活时间不如对照组（P0.05）。从精子总存活时间看，3个试验组均比对照组高，其中1.5%、3%浓度组与对照组相比差异极显著（P0.01），4.50%组与对照组差异不显著（P0.05）。3个试验组的存活指数均低于对照组，且4.50%浓度组与对照组差异极显著（P0.01），说明了含PC稀释液中精子活力下降较含卵黄的稀释液快。结果表明，用低浓度大豆PC取代卵黄在低温下保存猪精液，虽然精子活力相对下降较快，但可以有效地延长精子的存活时间。 　　3讨论 　　迄今为止，猪精液0-5 ℃下液态保存在国内外未见商业化成功的报道，究其原因是：猪精子在保存过程中，容易受到各种刺激而产生不利于精子生存的影响。其中，温度变化所造成的刺激对精子的打击极大，当温度急剧下降至10℃以下时，精子会发生冷休克现象，并且这个过程是不可逆转的，对精子来说是致命的伤害；同时，低温打击使精液产生大量的精子细胞活性氧（reactive oxygen special，ROS），而ROS能够破坏精子的蛋白表达结果，从而造成细胞凋亡。因此，一方面，低温保存精液时，要在稀释液中加入低温保护剂，防止精子发生冷休克而影响精子的生存和保存质量；另一方面，研制更为简易、高效的猪精液低温保存稀释液配方及操作程序，已经成为猪精液保存技术的研究热点。 　　目前常用的动物源性低温保护剂是卵黄和牛奶，但其作用机理尚未阐明。1939年，Phihphs首次将卵黄作为添加剂应用于低温保存稀释液中[3]。研究发现，稀释液中添加的卵黄和奶类主要是利用其磷脂成分尤其是PC而起到保护作用。PC由法国人Gobley于1844年首先从蛋黄中分离出来，其化学名称为磷脂酰胆碱，由磷脂酸和胆素合成，纯净品在常温下为一种无色无味的白色固体，但常由于制取或精制方法、储存条件不同而呈现淡黄色至棕色。PC的融点较低，低温下不易冻结，从而保护精子的生存，此外，脂蛋白以及含磷脂的脂蛋白复合物也有防止精子冷休克的作用[3]。PC能够参与细胞膜的组成，改善脂类