泰乐发酵优化剖析.ppt

泰乐菌素发酵生产 改良办法 主要内容 泰乐菌素介绍 改良的基本途径 选育改良的具体目标 总述 抗生素的发现 青霉素能抑制其周围葡萄球菌的生长；链霉菌对顽固的结核杆菌有明显抑制作用 。 拮抗作用：一类微生物抑制或杀死它类微生物的作用。 1.抗生素介绍 一、泰乐菌素介绍 抗生素的概念：抗生素是指微生物在代谢过程中产生的，在低浓度下就能抑制它种微生物的生长和活动，甚至杀死它种微生物的化学物质。 来源: 微生物，高等动、植物产生的代谢物，化学方法合成或半合成的化合物。 性能：抗细菌、抗肿瘤、抗病毒、抗真菌、抗寄生虫、杀虫除草等。 2. 泰乐菌素介绍 泰乐菌素( Tylosin)：又名泰乐星，泰洛霉素，为大环内酯类抗生素，它对支原体抗性最强，低毒广谱，可用于治疗由耐青霉素细菌引起的感染，主要抗G +，对大部分G - 、螺旋体、大病毒也有作用。产生菌有弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae, NRR2702, 2703) ，龟裂链霉菌( S. rim osns )和吸水链霉菌( S.hygro - scop icus) 。工业生产多利用新霉素链霉菌。 合成：泰乐菌素内酯环是由五个丙酸、二个乙酸和一个丁酸组成,内酯环上再依次连上6 - 脱氧- D - 阿洛糖 (M yc inose),碳霉氨基糖(M ycam inose) 和红霉糖(碳霉糖,M yca rose) 。以上三个糖均来自葡萄糖, N -上两个甲基及2′及3′上的两个甲基来自甲硫氨酸。 发酵：发酵过程中，同时存有4个组份，分别是泰乐菌素A，去碳霉糖泰乐菌素B、大菌素C及雷洛菌素D。发酵初期生物合成以泰乐菌素A 为主，随着发酵周期的延长，A组份与C组份比例发生转化，A 组份相对减少，C组份相应升高。由于A 组份具有最强的生物活性，发酵后期, 需将C组份向A 组份定向转化，使A 组份含量达80% 以上，方能放罐，组份A 与组份C 结构之间的差别，主要是R2基的不同，要使组份C转化为组份A，必须促使组份C进行甲基化反应，必须有大菌素C甲基转移酶的促进作用。 二、育种改良的具体目标 提高产量。 (2) 提高产物的纯度，减少副产物；提高有效组分 。 (3) 改变菌种性状。 (4) 使种的遗传性状，特别是生产性状稳定。 (5) 改变生物合成途径，以获得新产品。 三、改良的基本途径 最常用的菌种改良手段是诱变及筛选。随着对抗生素生物合成途径及其相关基因的分子生物学研究的深人， 抗生素育种技术结构将会逐步转向以基因工程技术为主的多样化的育种结构方式。国内外采用多种方式提高泰乐菌素生产产量，介绍如下： （1）传统的诱变及筛选 （2）发酵过程改良 （3）基因重组 （4）基因工程技术 传统的诱变及筛选是最常用的菌种改良手段。菌种选育的第一步工作就是利用自发突变进行自然选择。所谓自然选择就是从一个菌种的群体中,不经过任何诱变因素处理, 利用自发突变直接选择所需要的变种。目前许多新抗生素的生产菌种的选育也以自然选择为开端。 1.传统的诱变及筛选 新诱变因子及诱变技术的开发： ①新的诱变剂- 低能离子束（离子注入是20 世纪80 年代兴起的一种表面处理技术）。 ②近年来，激光辐射诱变和微波电磁辐射诱变亦颇受注意。 ③多年来为提高诱变效率,育种工作者在诱变方法上作了不少改进。其中尤以原生质体诱变的效果比较突出。 ④诱变时增变因子(助变剂) 等的作用 自然选择的目的: ①纯化原种 ②稳定生产 ③巩固变种和杂种的特性 ④提高产量。 诱变是用物理、化学或生物的诱变因子修改目的微生物的基因组，产生突变型。在实践中也还有用抗生素作为诱变剂的实例。诱变育种包括个环节以合适的诱变方法处理大量而分散的微生物细胞悬浮液, 在引起绝大多数细胞致死的同时, 使存活个体中的变异频率大大提高设计一种有效的筛选方法淘汰负变株, 并把正变株中少数变异幅度最大的具有优良性状的菌株巧妙地挑选出来。 3.发酵过程改良 碳源、PH控制 泰乐菌素的发酵以豆油为主要碳源。若分化期发酵中存在过量的葡萄糖，则促进ATP水平的上升，从而抑制泰乐菌素的生长，而豆油中的油酸、亚油酸经过甲基化形成甲基油酸，它是泰乐菌素的前体物质，能促进其生物合成。 细胞内ATP水平对抗生素生产的影响 细胞内ATP水平的控制对抗生素生产也很重要。为进行抗生素生物合成，必须使产生期中细胞内ATP保持低水平。弗氏链霉菌NRRL2702生物合成泰乐菌素与细胞内腺苷酸（ATP、ADP、AMP）浓度有关系。据研究, 在发育迅速的阶段(2天)ATP及ADP的细胞内浓度达到最高值, 然后在泰乐菌素合成刚要开始之前下降。产生期腺苷酸总量迅速下降, 结果使泰乐菌素的生物合成受到抑制。表明ATP浓度或腺苷酸水平或此两者都是调节泰乐