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2. 按其凝胶的组成系统可分为 连续凝胶电泳：整个电泳体系中所用的缓冲液成分、pH、凝胶孔径都相同 不连续凝胶电泳：在电泳体系中采用两种以上的缓冲液、pH值和孔径 梯度凝胶电泳：采用梯度混合装置，使制得 的凝胶由上至下孔径逐渐减小 即凝胶浓度由上 至下逐渐增高 。梯度凝胶电泳主要适宜于测定 球蛋白的相对分子质量。 SDS-凝胶电泳：在聚丙烯酰胺凝胶中加入 SDS 十二烷基硫酸钠 2 AP、TEMED 一般AP溶液仅能存放一周。 TEMED为淡黄色油状液，原液应密闭贮存 于4℃冰箱中。增加AP和TEMED可加快聚合速 率，但过量的AP和TEMED会引起电泳时烧胶和 谱带变形。 1. 样品的浓缩效应 （1）凝胶层的不连续性 样品胶：大孔胶，样品预先加在其中，起防止对流的作用，避免样品跑到上面的缓冲液中。（目前电泳一般不制作） 浓缩胶：大孔胶，有防止对流作用，样品在其中浓缩，并按其迁移率递减的顺序逐渐在其与分离胶的界面上积聚成薄层。 分离胶：小孔胶，样品在其中进行电泳和分子筛分离。蛋白质分子在大孔径凝胶中受到的阻力小，移动速度快，进入小孔胶时遇到阻力大，速度减慢。由于凝胶的不连续性，在大孔与小孔凝胶的界面处就会使样品浓缩，区带变窄。 （2）缓冲离子成分的不连续性 在电场中如有两种电荷符号相同的离子向同一方向泳动，其迁移率不同，两种离子能形成界面，走在前面的离子称为快离子（前导离子），走在后面的离子称为慢离子（尾随离子）。为使样品达到浓缩的目的，需在电泳缓冲系统中加入有效迁移率大小不相同的两种离子。并使这两种离子在缓冲系统中组成不连续的两相。即在三层凝胶中加入快离子，在电极缓冲液中加入慢离子。被分离蛋白质分子的有效迁移率介于快慢离子之间，于是蛋白质在快慢离子间形成的界面处，被浓缩成极窄的区带。 （3）电位梯度的不连续性 在不连续系统中，电位梯度的差异是自动形成的。电泳开始后，由于前导离子的迁移率最大，就会很快超过被分离物，因此在快离子后面，形成一个离子浓度低的区域，这时就有了较高的电位梯度。这种高电位梯度使后面被分离物和尾随离子在前导离子后面加快移动。当前导离子、被分离物和尾随离子的移动速度相同时，建立一种稳定状态，这时在前导离子和尾随离子之间形成一个稳定而又不断向正极移动的界面，由于蛋白质样品的有效迁移率恰好介于快、慢离子之间，因此也就聚集在这个移动的界面附近，被浓缩形成一个狭小的中间层。 （4）pH的不连续性 在浓缩胶与分离胶之间有pH的不连续性，这是为了控制慢离子的解离度，从而控制其有效迁移率。要求在样品胶和浓缩胶中，慢离子较所有被分离样品的有效迁移率低，以使样品夹在快、慢离子界面之间，使样品浓缩。而在分离胶中慢离子的有效迁移率比所有样品的有效迁移率高，使样品不再受离子界面的影响，以便蛋白质样品在其中进行普通的电泳分离和分子筛分离。 SDS是阴离子去污剂，在水溶液中，以单体和分子团的混合形式存在，由于SDS带有大量负电荷，当其与蛋白质结合时，所带的负电荷大大超过了天然蛋白质原有的负电荷，因而消除或掩盖了不同种类蛋白质间原有电荷的差异，使蛋白质均带有相同密度的负电荷，因而可利用分子量差异将各种蛋白质分开。 五、凝胶电泳的操作要点 1．凝胶的制备 制备凝胶时，要避免气泡存在。因此各种贮存液混合后，应进行抽气处理。 5．脱色 将经固定和染色的凝胶，浸于脱色液 7％的乙酸溶液）中脱色，隔一段时间换一次脱色液，直至无蛋白质处无色透明为止。 * 第二节 聚丙烯酰胺凝胶电泳 ? Polyacylamide Gel Electrophoresis,PAGE 聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺 Acr 和交联剂甲叉双丙烯酰胺 Bis 在催化剂过硫酸铵 或维生素B2 和加速剂四甲基乙二胺（TEMED）的作用下聚合，并联结成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳。 按其电泳装置和凝胶的形状可分为： 垂直管状电泳（圆盘电泳） 垂直板型电泳 一、分类： 二、凝胶聚合的原理及有关特性 1．聚合反应 凝胶的聚合常用过硫酸铵 AP 为催化剂，四甲基乙二胺 TEMED 为加速剂。此外，核黄素亦可为催化剂，聚合需光照，故使用不多。 2．凝胶的有关性质 （1）凝胶性能与总浓度及交联度的关系 凝胶的孔径、机械性能、弹性、透明度、黏度和聚合程度取决于凝胶浓度和交联度。100ml凝胶溶液中含有的单体和交联剂总克数称为凝胶浓度 T 。 T % [Acr g +Bis g ]/V ml ×100% 凝胶溶液中，交联剂占单体加交联剂总量的百分数为交联度 C 。 C % Bis/ Acr+Bis ×100% 2 凝胶浓度与孔径的关系 一般来说，凝胶浓度越大，孔径越小，移动颗粒穿过网孔阻力越大。反之孔径越大。 3 凝胶浓度