实验二沉淀反应(2015修改)讲稿.pptVIP

实验二 沉淀反应 一、环状沉淀反应 二、双向琼脂扩散试验 原理：将可溶性抗原层积于抗体之上，如 果二者相应，则可在抗原、抗体两 液接触界面形成白色的沉淀环。 目的：以炭疽环状沉淀反应为例，掌握 沉淀反应原理、操作方法及结果 的判定方法。 一、环状沉淀反应 1．被检抗原（沉淀原）的制备： （1）热浸法 取可疑材料约1克，研碎，加入5-10mL生理盐水混合，转至试管内，煮沸30min，取出冷却，用滤纸过滤，滤液即为被检的沉淀原。 （2）冷浸法 取疑为炭疽的皮革和兽毛，高压灭菌后，取1cm2或兽毛数克浸于5-10倍的0.5%石炭酸生理盐水中，4℃浸渍18-24小时，同上法过滤。 一、环状沉淀反应 实验材料： 2．炭疽标准抗原 3、炭疽阴性抗原（健康组织浸出液） 4．阳性、阴性炭疽沉淀素血清 5．毛细吸管 沉淀反应管（Φ 0.3-0.4cm ） 一、环状沉淀反应 实 验 步 骤 用毛细吸管吸取炭疽沉淀素，插入沉淀反应管底部，缓慢注入到距管底的1/3处。 用另一支毛细吸管吸取被检材料，插入离沉淀管底近1/3处，沿管壁缓慢加入到沉淀素的上面，边注边提使达到2/3高度处即可。 静置5－10min 结果观察 设阳性、阴性对照 一、环状沉淀反应 试验组 阳性对照组 阴性对照组 一、环状沉淀反应 结果判定： 两液面交界处出现清晰、致密 如线的白轮，是炭疽阳性。 无此现象为炭疽阴性。 一、环状沉淀反应 二、双向琼脂扩散试验 目的：掌握双向琼脂扩散试验的原理、 操作方法及结果判定方法。 原理： 可溶性Ag与Ab在含有电解质的半固体（1%）琼脂内进行自由扩散，当两者由高浓度向低浓度扩散相遇时，如果二者相对应而且比例适当，则可在相遇处形成白色的沉淀线，为阳性反应。另外，沉淀带对于组成它的Ag、Ab具有特异地不可透过性，而对其它的Ag与Ab是可透过的，所以一条沉淀带仅代表一种AgAb系统的沉淀物。 二、双向琼脂扩散试验 1、鸡传染性法氏囊病毒标准抗原； 2、鸡传染性法氏囊病毒标准阳性血清； 3、待检血清：来自受检鸡的新鲜血清； 4、平皿（Φ6cm）、打孔器、微量加样器等； 实验材料： 二、双向琼脂扩散试验 5、琼脂凝胶板： 将琼脂糖1.0克、NaCl 8.0克、蒸馏水100ml装入三角烧瓶，煮沸，然后用吸管吸取7ml加入平皿内（勿有气泡）使成约3mm厚的凝胶，待冷却凝固后按如下图方式打孔。 注意:孔间距为孔的直径大小,打孔完毕要封底） 二、双向琼脂扩散试验 实验步骤： 中间孔加标准抗原，外周孔加被检血清及阳性血清（如要测被检血清的效价，外周孔可倍比稀释后依次加入）。加样后盖上皿盖，37℃扩散24小时，观察结果。 二、双向琼脂扩散试验 Ab 生理 盐水 Ag ? 　阳性：标准对照孔之间有明显的沉淀线时， 受检孔与中央孔之间形成沉淀线并与 阳性对照沉淀线融合。 　阴性：受检孔与中央孔之间无沉淀线。 　 结果判断： 二、双向琼脂扩散试验 一种抗原-抗体反应的现象。在凝集反应或沉淀反应中，由于抗体过剩或抗原过剩，抗原与抗体结合但不能形成大的复合物，从而不出现肉眼可见的反应现象。 抗体过剩：前带现象； 抗原过剩：后带现象。 带现象（zone phenomenon） 作业： 完成实验报告，画出你所观察到的沉淀线，并对其进行简要说明。