华东理工大学2004–2005返学年第二学期基因工程期末考试答案.docVIP

华东理工大学2004–2005学年第二学期 《 基因工程 》课程期末考试试卷 B 2005.6 答案与判分标准 开课学院：生物工程学院， 考试形式：开卷， 所需时间：120分钟 考生姓名： 学号： 专业： 班级 题序 一 二 三 四 五 六 七 八 总 分 得分 评卷人 一、问答题（共15分） 某表达质粒上含有一个能在大肠杆菌中可溶性表达的基因A，若将外源基因B插入到基因A的3 末端，使之产生可溶性融合蛋白A-B，试设计合理的重组方案。（15分） ___ 起始密码子 A 基因全序列 ATGATCGGGATTCGCTGGGATAAAGTGCACCTCAATATAGCACACGCTTGCAACGCAAAGAGC CCCGATTTCTGTAACCGCCAGCACAAAGATGCGGAACACCCAAAAGTGGCGGCAAACGCCTTC AACCGGATCCCGGGATATCAGCTGAGATCTGCTTTCTAG ___ 终止密码子 ___ 起始密码子 B 基因部分序列 TCCCGGGATCCATGCTC.........................CGCTAAGAGGATCCTCCCGGGT ___ 终止密码子 BamHI：G\GATCC BglII：A\GATCT EcoRV：GAT\ATC EcoRI： G\AATTC SmaI：CCC\GGG PvuII：CAG\CTG A基因和B基因均用SmaI切开； 或者A基因用BglII切开，B基因用BamHI切开 其他合理的重组方案同样给分。 二、问答题（共15分） 简述基因洗牌术（DNA Shuffling）的工作原理及用途。 利用同源基因之间的互补性，实施易错PCR扩增，由此引入大面积随机点突变，创建突变体库，然后利用高通量筛选模型，获得目标突变基因。主要用于蛋白质工程中。 未提到使用易错PCR方法的，扣5分； 未提到引入大面积随机点突变的，扣3分； 未提到使用高通量筛选模型的，扣2分； 未提到用于蛋白质工程中的扣5分，但提到用于基因定向突变不扣分。 三、问答题（共10分） 为什么说多型汉逊酵母表达系统有可能比巴斯德毕赤酵母表达系统更优越？ 因为多型汉逊酵母表达系统除具有巴斯德毕赤酵母表达系统的所有优点外，还允许重组分子以多拷贝的形式整合在染色体上，从而使外源基因的表达水平更高。 未提到多型汉逊酵母表达系统具有巴斯德毕赤酵母表达系统的所有优点的，扣3分； 未提到多型汉逊酵母表达系统允许外源基因多拷贝整合的，扣6分。 四、问答题（共20分） 人促红细胞生长素（EPO）系一糖蛋白，其生物活性严格依赖于糖基侧链的序列和大小，临床上主要用于改善癌症患者由于放疗化疗所引起的红细胞降低症侯群。试设计一种高产人EPO的重组表达系统，内容包括： （1）选择合适的受体系统，并说明理由；（6分） （2）选择合适的载体系统，并说明理由；（6分） （3）确定合适的高效表达方案，并简述其机制。（8分） （1）中国仓鼠卵巢细胞（CHO），研究成熟、安全可靠、耐剪切力，易于规模化悬浮培养； （2）SV40-大肠杆菌穿梭载体，表达效率高、操作简便、成熟可靠； （3）DHFR-MTX或GS-MSX基因扩增系统，抗性细胞株通过扩增其DHFR或GS基因而抵消MTX或MSX的毒性作用。 未选择CHO细胞，但选择其他哺乳动物细胞的，扣3分； 选择CHO细胞，但优点说明不完整的，扣1分； 选择酵母表达系统的，扣3分； 未说明选择理由的扣3分； 未选择SV40载体系统但选择其他表达载体的不扣分； 选择SV40载体系统，但理由不充分的扣2分； 选择DHFR-MTX或GS-MSX基因扩增系统，但没有说明工作原理的，扣3分； 选择DHFR-MTX或GS-MSX基因扩增系统，但工作原理表述不完整的，扣1分； 未选择DHFR-MTX或GS-MSX基因扩增系统的，扣5分。 五、问答题（共20分） 随着植物转基因技术的日趋成熟，世界范围内被批准上市的转基因农作物也不断涌现，然而人们对转基因产品的安全性仍有争论，至少他们要求对餐桌上的食物是否由转基因植物加工而成拥有知情权。为此，建立一种能区分转基因植物和天然植物的检测方法十分重要。目前，世界各国批准上市的转基因植物种类繁多，但绝大多数使用花椰菜花斑病毒（CaMV）的35S启动子。请设计一种能快速灵敏地检测转基因植物的实验程序，并简述其机制。 设计合成与CaMV 35S启动子匹配的引物，从待检测植物中制备DNA，PCR扩增，阳性为转基