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直接免疫荧光法同时检测儿童多种呼吸道病毒抗原的临床应用 　　摘要：目的 分析儿童多种呼吸道病毒抗原采用直接免疫荧光法同时检测的临床应用效果。方法 针对我所2011年2月～2013年接待的1000例呼吸道感染患儿作为研究对象，将他们呼吸道分泌物中的病毒抗原采用直接免疫荧光法同时检测，主要包括七种病毒抗原，即RSV（呼吸道合胞病毒）、FB（流感病毒B型）、FA（流感病毒A型）、PIV1（副流感病毒1型）、PIV2（副流感病毒2型）、PIV3（副流感病毒3型）、ADV（腺病毒），统计分析相关情况。结果 1000例呼吸道感染患儿中，检出101例病毒感染患儿，占10.10%。其中，最多的病毒抗原为RSV共计58例占57.43%，其次为混合型，共15例占14.85%，再次为ADV，共8例占7.92%；此外，随着年龄增长，呼吸道病毒感染率呈现下降趋势，而儿童呼吸道感染在冬春两季发生率较高，在本次研究中显示明显多于夏秋两季。结论 儿童多种呼吸道病毒抗原采用直接免疫荧光法同时检测效果比较明显，该检测方法有着高效、快速、经济、简便及经济等优势，值得临床借鉴。 　　关键词：儿童；呼吸道感染；病毒抗原；直接免疫荧光法；同时检测；临床应用 　　就这几年我国儿科临床研究发现，呼吸道感染属于儿童感染性疾病中最为常见的一种，并且已经表明大约有95%左右的急性上呼吸道感染与大部分下呼吸道感染的发生是因为细菌以外的病原体所致，其中最为多见的当属病毒感染[1]。总的来说，病毒所致的儿童呼吸道感染会因为年龄、季节及病原类型的不同而存在差异，虽然这些年抗生素广泛应用，呼吸道细菌感染呈现下降趋势，但是呼吸道病毒感染却与日俱增[2]。虽然当前检测这方面的方式很多，不过要么存在不足，要么比较复杂且昂贵，为了进一步分析该检测方法同时检测儿童多种呼吸道病毒抗原的临床效果，我所展开了相关研究，现将结果作如下报告。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 我所2011年2月～2013年接诊的1000例呼吸道感染患儿，全部经临床确诊，其中男患儿573例、女患儿427例；年龄5个月～11岁，平均为（5.6±2.9）岁。分别采集患儿的鼻咽部分泌物进行检测，其中量为1～2ml，检测在2h完成。 　　1.2方法 本次研究采用的仪器为BX51型荧光显微镜，而试剂则为呼吸道病毒诊断试剂盒，全部患儿的分泌物皆采用直接免疫荧光法检测，具体操作如下：①标本采集与运送：从鼻腔处将采样导管插入7～8cm，以便其达到咽部下，然后采用诱导吸取的方式，收集患儿分泌物1～2ml，并放置在无菌瓶中，应注意减少大量唾液的混入而影响检出率；送检的人员必须迅速与谨慎，快速达到检测地点并及时检测可以减少细胞的破裂与死亡，进而影响检测结果（造成假阴性）。②细胞涂片制备：打匀样本（鼻咽处的分泌物）后，将其移到尖底离心管中，并以1500r/min进行离心处理，时间为5min，然后将其上清液去除后留下沉淀，利用PBS进行沉淀洗涤，次数以洗涤彻底为宜，尽量减少黏丝或黏液造成非特异性荧光而影响正常检测[3]；在0.5～1ml的PBS溶液中将沉淀溶解，并吹打成细胞悬液，然后在玻片上点七个样（每孔为25μl），经室温风干后采用冷丙酮加以固定。③直接免疫荧光法检测：将前述制备好的细胞涂片和病原体对照玻片一起，同时采用直接免疫荧光法进行检测。 　　1.3统计学分析 本次研究相关数据采用统计学软件SPSS18.0处理，计数资料用%表示，行χ2检验，以P0.05差异为统计学有意义的标准。 　　2结果 　　2.1病毒感染情况 1000例呼吸道感染患儿中，检出101例病毒感染患儿，百分比为10.10%。其中，最多的病毒抗原为RSV，总计58例，百分比为57.43%，其次为混合型，总计15例，百分比为14.85%，再次为ADV，总计8例，百分比为7.92%。见表1。 　　2.2不同年龄病毒感染检出情况 随着年龄增长，呼吸道病毒感染率呈现下降趋势，其中0～1岁检出率要明显高于1～6岁与6～11岁，见表2。 　　2.3不同季节感染情况 儿童感染呼吸道病毒在不同季节情况有所不同，其中冬春两季发生率要明显高于夏秋两季，差异性显著（P0.05），有统计学意义，见表3。 　　3讨论 　　这些年相关临床研究显示大部分儿童呼吸道感染发病是由于多种病毒所致，而儿童急性呼吸道感染引发的病毒主要是呼吸道合胞病毒、流感病毒B型、流感病毒A型、副流感病毒1型、副流感病毒2型、副流感病毒3型、腺病毒等。临床做好早期诊断，能为临床治疗提供依据与参考，有着很高的临床价值。 　　虽然检测病毒感染的临床方法很多，不过都有一定的局限性，比如说病毒分离培养，其是传统检测的金标准[4]，但是其费时与耗力，并且结果很难为临床提供指导；再比如病毒特异性抗体检测，这是检测病毒