补气活血药对急性心肌梗死模型大鼠梗死心肌边缘区域新生血管的影响.docVIP

补气活血药对急性心肌梗死模型大鼠梗死心肌边缘区域新生血管的影响 　　[摘要] 目的：探讨补气活血药物对急性心肌梗死模型大鼠梗死心肌边缘区新生微血管数目以及VEGF，bFGF蛋白表达的影响。方法：构建大鼠急性心肌梗死动物模型。造模成功后，将大鼠随机分为：假手术组、模型组、丹参-黄芪（1∶2）组、丹参-黄芪（1∶1）组、川芎-黄芪（1∶2）组、丹参组、川芎组、赤芍组、麝香保心丸组，每组5只。各给药组按照13.5 g·kg-1·d-1灌胃，每日1次，共给药3周。采用免疫组化SP法检测心肌组织中vWF的表达，计数微血管数目（MVC）；采用Western blotting印迹法检测心肌组织中VEGF，bFGF蛋白的表达。结果：假手术组、模型组、各给药组大鼠梗死心肌边缘区域均可见vWF因子标记染色的新生微血管，假手术组大鼠心肌中新生微血管不明显，模型组大鼠梗死心肌边缘区域可见到少量新生成的微血管，各给药组大鼠梗死心肌边缘区域可见较多新生微血管。模型组与假手术组比较，差异有统计学意义（P0.05）；各给药组与模型组相比较差异有统计学意义（P0.05或P0.01）。假手术组大鼠心肌中的VEGF，bFGF的蛋白表达最少，模型组与之相比较，差异具有统计学意义（P0.05），各给药组与模型组相比较，VEGF，bFGF的蛋白表达有较显著的增多，差异具有统计学意义（P0.05或P0.01）。结论：丹参、川芎、赤芍、丹参-黄芪（1∶2）组、丹参-黄芪（1∶1）组、川芎-黄芪（1∶2）组药物可以促进血管的生成，推测这些药物促进血管生成的机制可能是通过促进VEGF，bFGF的蛋白表达，从而增加VEGF，bFGF的含量以促进新生血管的生成。 　　[关键词] 补气活血；血管生成；心肌缺血；VEGF；bFGF 　　[收稿日期] 2013-06-27 　　[基金项目] 国家自然科学基金项目81373990）；江苏省六大人才高峰项目（013034010004） 　　[通信作者] *唐德才，教授，博士生导师，Tel：（025E-mail：talknow@163.com 　　[作者简介] 臧文华，博士研究生，E-mail：zangwenhua2004@163.com 　　血管生成的研究中，微血管数目（MVC）是被经常采用的能够较直观有效的反映新生血管数目和侧枝循环建立情况的指标，血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）是心肌受到缺血、缺氧等损伤时促进新生血管生成的重要的生长因子[1]。本课题组在前期研究中，将10种活血化瘀药（赤芍、川芎、丹皮、丹参、大黄、莪术、乳香、三棱、三七、苏木）分别与3种补气药（黄芪、人参、西洋参）按照1∶2，1∶1，2∶1的配比两两配伍组合，应用MTT法和划痕实验初步筛选出对血管生成具有较明显影响的药物和配伍组合：丹参-黄芪（1∶2）、丹参-黄芪（1∶1）、川芎-黄芪（1∶2）、丹参、川芎、赤芍。本实验以前期细胞实验中筛选出的活血化瘀药和补气活血药对作为研究对象，利用大鼠急性心肌梗死动物模型，观察经过实验药物干预后的模型大鼠梗死心肌边缘区新生微血管数目的变化以及VEGF，bFGF蛋白的表达，评价实验药物对模型大鼠心梗边缘区域微血管生成的促进作用，同时也为临床用药提供实验依据。 　　1 材料 　　1.1 动物 清洁级雄性SD大鼠96只，体重200 g左右，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，动物合格证号SCXK（沪）2008-0016。 　　1.2 药物 丹参、赤芍、川芎、黄芪购自先声再康药房（批，经南京中医药大学药学院吴德康教授鉴定，分别为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根茎，毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora pall.的干燥根，伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎以及豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus （Fisch.） Bge. var. mongholicus （Bge.）Hsiao的干燥根；阳性对照药品：麝香保心丸（上海和黄药业有限公司，批号。实验药物先用水浸泡30 min，大火煎煮沸腾后改用小火加热30 min，收取1次药液；再加水煎煮，方法同前，第2次煎煮之后，去除药渣，用滤纸过滤，将2次药液混合加热浓缩成1 g·mL-1的水煎液。各实验药物按以上方法分别煎煮并密封分装保存于4 ℃冰箱内备用。 　　1.3 试剂 SP试剂盒，中性树胶，多聚赖氨酸（均由福州迈新生物科技有限公司提供）；苏木素染色液（南京建成生物工程有限公司）；全蛋白抽提试剂盒，Braford蛋白含量检测试剂盒，SDS凝胶配