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课程设计 题 目 学 院 专 业 班 级 学 生 学 号 / 填写日期：二〇一五年月杭州办证 抗菌肽的合成方法与生物活性综述 唐红东 （生命科学学院 25） 摘要： 抗菌肽最早是指昆虫体内经过诱导而产生的一种有抗菌活性的多肽物质，分子量通常在2000～7000左右，由20～60个氨基酸残基构成。这一类型活性多肽大多具有强碱性、热稳定性和广谱抗菌等特点，更因其具有包括抗细菌、真菌、病毒、原虫、癌细胞等多种生物在内的活性，且很难产生抗药性，所以应用前景十分广阔。本文概述了抗菌肽的分类、结构特征、生物活性、作用机制以及抗菌肽生物合成的方法、应用，指抗菌肽研究和应用中的存在问题。 关键词： 抗菌肽；；生物合成 抗菌肽（antibacterial peptide， ABP（antibacterial peptide）Boman等，通过向眉纹天蚕蛾（Samia cyhthia）（Hyalophra cecropia）（cecropin）Magainins就能杀死革兰氏阳性细菌、阴性细菌、真菌、原生动物，甚至真核生物的肿瘤细胞，但却不伤害体细胞或红细胞。Magainin家族肽由于其氨基酸的数目少，具有抗菌活性，当人类感染细菌、真菌或原虫之后，可能具有治疗疾病的潜力。目前应用基因工程的方法合成Magainin已经进入临床三期试验阶段。 1.2.3 鱼类抗菌肽 鱼类抗菌肽是鱼机体天然免疫的重要部分，是一种小分子蛋白质，它的结构与组成复杂多样。鱼类抗菌肽的合成多数以前肽原形式，通过酶解方式切除信号肽以及羧基端酸性片段后，形成具有活性的成熟肽。成熟肽有很强的抑菌活性，其最小的抑制浓度大多在毫摩尔水平。迄今，几十种鱼类抗菌肽已被分离出来，并且多个抗菌肽基因已经能被克隆。 1.2.4 哺乳动物抗菌肽 在哺乳动物中，抗菌肽由吞噬细胞和黏膜上皮细胞表达。Lee（1989）最先从猪小肠分离出杀菌肽P1，Agerberth 。AnderssonProtegrins（PGs）。Schonwetter（Bactencin。Shamova杀菌肽（cecropins）、爪蟾抗菌肽（magainins），防御素（defensins），宣肽素（tachyplesins）以及内源型抗菌肽（cathelicidin）。 第二章 抗菌肽的生物合成 1 抗菌肽的设计及合成 1.1 抗菌肽的设计 虽然抗菌肽和传统抗生素相比表现出了许多优点，但是很多天然抗菌肽药物的代谢动力学与药物毒性还不是很清楚，其生产和制备成本比较高，且部分抗菌肽抗菌谱较窄、抗菌活性较低、稳定性差，有些抗菌肽活性和溶血活性都较强，故设计或改造抗菌肽来获得更加安全、有效、稳定的抗菌肽则具有现实意义。目前为止抗菌肽的设计主要是利用结构辅助设计的方法来对母肽分子进行适当的改变来优化抗菌肽的净电荷、疏水氨基酸残基比例、两亲性、分子柔性或特定的二级结构。 1.1.1 序列修饰法 该方法包含了所有对天然抗菌肽修饰，包括删除、添加或者将一个或多个氨基酸残基更替、截断肽的N-端或C-端或者将组天然肽的不同肽段嵌合。此方法已经被广泛应用于Cecropin， Magainin和MelittiAMSDb，APD，DAMPD，YADAMP和AMPer；Peptaibol，PenBase，BACTIBASE，Defensins，DAPD和PhytAMP；（R.Bmerrifleld首创的，R.B.merrifield首先提出了将氨基酸的羧基末端和一类固体树脂载体上的化学基团连接，暴露出的氨基端用于接肽反应，下一步需要连接的氨基酸则利用不同的方法保护其氨基端及侧链基团，仅允许它的羧基端暴露并活化，和连在树脂上的氨基端进行连接反应。由于此方法不只用于抗菌肽合成，同时对化学有机合成也有深远的影响，R.B.merrifieldHPLC设备来进行纯化。这都是使用固相合成方法的一些不足。所以为了弥补这些不足，化学家后来又开发了片断相连法来连接更长的抗菌肽。 1.2.3片断法合成 液相片断合成的基础其实还是固相合成，其基本原理是利用固相合成法先合成所需要合成的抗菌肽段的所有片断，例如十个氨基酸残基的肽段；而后分别纯化鉴定，最终再把这些抗菌肽片断在溶液中或者树脂上按照顺序全部连接起来。依此方法能够合成利用传统固相合成方法不能够合成出来的比较长的抗菌肽[10]。一般来说较短的肽段比较好合成，纯化也较容易，所以片断的合成比长肽要容易制备；随后以片断为单位连接成长肽，如果在合成中片段没有连上，则连接的片 断和最终产物理化性质也有较大的不同，所以比较容易分离，这使得分离纯化更好的进行。利用这个方式，可以合成的抗菌肽长度能达到100个左右的残基。这是它的长处，而短处就是要消耗更多的试剂；同时，每个片