灵芝多醣液态发酵及萃取制程最适化研究.docVIP

靈芝多醣液態發酵及萃取製程最適化研究 Optimization of submerged fermentation and extraction process of polysaccharide from Ganoderma tsugae 研究生：紐羅伯 Narkprasom, Nukrob 指導教授：古源光, 黃卓治 Guu, Yuan-Kuang, Huang, Tzou-Chi 【摘要】 松杉靈芝Ganoderma tsugae是眾所周知的藥用真菌，它具有許多的生理活性。松杉靈芝多醣已廣泛應用於各種食品和醫藥業中。松杉靈芝多醣是天然生成的藥物可用於保健醫學上，用在治療糖尿病和癌症患者，因此受到相當重視。這種由真菌中所萃取的化合物，可直接添加在食品中作為強化生理活性成分。然而，天然的松杉靈芝的生長速度是相當緩慢地。許多研究都試圖以開發大量生產松杉靈芝的培養系統。因此，本研究主要針對靈芝液態發酵及子實體萃取製程來進行最適化條件之探討。 在松杉靈芝的液態發酵中，針對振盪速率的供氧量的效果及培養基體積對菌絲和胞外多醣 Extracellular polysaccharide, EPS 的生產作探討。一般菌絲的生長需要適當震盪速率約134 rpm，將較大的菌絲球破壞成幾個小的菌絲球。此外，較大培養容積可提供充足營養物的用量，而有助於最大菌絲生長需要。胞外多醣則需高速的攪拌速率來提高較佳的質傳作用，來達到較高產品濃度的要求。研究發現比較合適的培養基體積為150.4 ml，並利用提高基質質傳作用以有助於胞外多醣的生產。由松杉靈芝的菌體乾重 Dry cell mass, DCM 對胞外多醣作圖可以建立兩個生產方程式，並且這圖示法對液態發酵產業將是一個有用的工具。 松杉靈芝培養條件最適化條件是利用Plackett Burman設計法 Plackett Burman design, PBD 來進行篩選，確定最佳序列上是利用陡升路徑法 Method of path of steepest ascent Response surface method, RSM 來進行最佳化條件尋求。其中，麥芽糖，脫脂牛奶，pH值是松杉靈芝培養的重要參數。在31.031 g/l麥芽糖，14.055 g/l 脫脂牛奶和pH在 7.12的條件下， EPS的最大產量為415 mg/l。在相同的發酵液中，初始pH在 6.46下可得到最大菌體產量為15.776 g/l。在這些最佳條件的確認試驗中，發現可提高菌體產量和促進胞外多醣的生產，分別為控制組的13倍和1.5倍。這些結果顯示這些策略有助於松杉靈芝液態發酵程序的改善。 在松杉靈芝的量和胞外多醣的動力學模型。前的批培養最佳條件松杉靈芝的量和胞外多醣的動力學模型進行。菌絲和胞外多醣的立方根方程和Luedeking-Piret方程分別描述。兩個方程的參數所觀察和算法。松杉靈芝的量和胞外多醣的實驗值和預測模型之相關性R2，分別為96.05%和99.16%。這兩個動力學模型預測松杉靈芝和胞外多醣的。 松杉靈芝子實體的粗多醣體萃取程序是採用中心組合設計法 Central Composite design, CCD 來進行最佳化條件尋求。在這項研究中的參數為：萃取溫度 82-98 C ，萃取時間 199-441 min 和水對原料的比例 13-47 ml/g 。迴歸統計分析顯示，二次方程式的模型最符合來做生產最佳化的預測 R2 98.68% 。萃取程序的最佳條件發現為：94 C萃取溫度，337分鐘的萃取時間和水對原料的比例為27.89 ml/g。在這些條件下，多醣的預測值是0.719%。 關鍵字：松杉靈芝，液態發酵，胞外多醣，Plackett Burman設計法，反應面法，立方根方程式，Luedeking-Piret方程式 【Abstract】 The fungus Ganoderma tsugae, has long been a well known medicinal mushroom and it has many pharmacological properties. Polysaccharides from G. tsugae have various applications in food and pharmaceutical industries. G. tsugae polysaccharide has received considerable attention to produce the medicine from nature for health care, treat diabetes and cancer patient, this extract