激光共聚焦显微镜在细胞骨架研究中的应用.doc

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激光共聚焦显微镜在细胞骨架研究中的应用

激光共聚焦显微镜在细胞骨架研究中的应用 摘要 随着生物技术研究的不断发展,对观察细胞形态所使用的仪器要求也越来越高,普通光学显微镜已经无法满足研究的需要,激光共聚焦显微镜的产生从一定程度上弥补了光学显微镜的不足。激光共聚焦显微镜具有分辨率高、灵敏度高、放大率高等优点,使得它在形态学、分子细胞生物学,神经科学、药理学、遗传学等领域研究中成为有力工具。本文就其在细胞骨架的研究方面做一简要综述。 关键词 激光共聚焦显微镜 细胞骨架 Laser Scanning Confocal Microscope in the study of cell skeleton Abstract With the development of biotechnology research, instrumentation requirements for cell morphology was observed being used increasingly high, ordinary optical microscope has been unable to meet the needs of the study, the generation of laser scanning confocal microscope optical microscope to make up to some extent from the inadequate. Laser scanning confocal microscope with high resolution, high sensitivity, magnification advantages, making it a powerful tool in the research field morphology, molecular cell biology, neuroscience, pharmacology, genetics, etc.. In this paper, a brief overview of their research in the cytoskeleton. Keywords confocal microscopy cytoskeleton 所谓激光共聚焦显微镜 Laser Scanning Confocal Microscope,简称LSCM 与传统显微镜相比,它具有分辨率高、灵敏度高、放大率高等优点,可以在细胞水平上进行多种功能的测量和分析,得到具有三维清晰度的原色图像,而且它还可以处理活的标本,不会对标本造成物理化学特性的破坏。随着软件开发和应用技术的不断完善,激光扫描共聚焦显微镜已成为形态学、分子细胞生物学,神经科学、药理学、遗传学等领域中新一代强有力的研究工具[1-2]。 正是由于激光共聚焦显微镜在细胞学中有很大的应用范围,本文就其在细胞骨架方面的研究做一简要综述。 1.LSCM的原理 1.1普通光学显微镜的原理 普通光学显微镜的成像系统由产生物像的光学系统 目镜和物镜 、照明系统和机械支架三部分组成。其中目镜和物镜都是具有放大成像功能的凸透镜。显微镜的放大倍数与每个凸透镜的放大倍数密切相关。 当物体与物镜的距离小于焦距时,在物体的同一侧形成的是正立放大的虚像。当物体与物镜的距离在1—2倍焦距之间时,在物镜的另一侧形成倒立缩小的实像。所观察的物体位于物镜的焦点的前方 1— 2倍焦距之间 ,在物镜的另一侧形成一放大、倒立的实像于目镜焦点以内 即在目镜的单倍焦距内 ,此物像通过目镜的再次放大,得到虚像。此物像比眼睛直接看到的物体AB要大得多,所以使用显微镜可以看清非常微小的物体[3]。 不过显微镜的分辨率受到一些物理因素的影响,主要有球差和色差两个方面。所谓球差,是由于透镜不能把近轴光线和远轴光线在光轴上共聚焦。以至透过标本一点的光线通过透镜后,不能聚焦成一点,而是形成一个光斑,从而使成像模糊不清。所谓色差,是由于显微镜对不同颜色的光线具有不同的折射率造成的。因为不同颜色的光具有不同的波长,透镜类似于三棱镜,对不同颜色的光线具有不同的折射率。所以光线透过透镜后。不同颜色的光聚焦在不同点上,从而使成像模糊,而且像的边缘尚带有色彩。 1.2 LSCM基于光学显微镜的改进[4] 1.2.1用激光做光源 因为激光的单色性非常好,光源波束的波长相同,从根本上消除了色差。 1.2.2采用共聚焦技术 在物镜的焦平面上放置了一个当中带有小孔的挡板,将焦平面以外的杂散光挡住,消除了球差;并进一步消除了色差。 1.2.3采用点扫描技术 将样品分解成二维或三维空间上的无数点,用十分细小的激光束 点光源 逐点逐行扫描成像, 再通过微机组合成一个整体平面的或立体的像。而

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