维生素E的含量检验方法.doc

维生素E的含量检验方法 一、目 的：建立含量检验，保证分析结果的准确性。 据：含量检验操作1、试制和溶液 1.1 无水乙醚：:不含有过氧化物。 1.1.1 过氧化物检查方法:用5 mL乙醚加1mL10%碘化钾溶液，振摇1 min，如有过氧化物则放出游离碘，水层呈黄色或加4滴0.5%淀粉溶液，水层呈蓝色。该乙醚需处理后使用。 1.1.2 去除过氧化物的方法：重蒸乙醚时，瓶中放人纯铁丝或铁末少许。弃去10%初馏液和10%残馏液。 1.2 无水乙醇：不得含有醛类物质 1.2.1 检查方法：取2mL银氨溶液于试管中，加人少量乙醇，摇匀，再加人氢氧化钠溶液，加热，放置冷却后，若有银镜反应则表示乙醇中有醛。1.2.2 脱醛方法：取2g硝酸银溶于少量水中。取4g氢氧化钠溶于温乙醇中。将两者倾人1L乙醇中，振摇后，放置暗处两天 不时摇动，促进反应 ，经过滤，置蒸馏瓶中蒸馏，弃去初蒸出的50 mL。当乙醇中含醛较多时，硝酸银用量适当增加。 1.3 无水硫酸钠。 1.4 甲醇：重蒸后使用。 1.5 重蒸水：水中加少量高锰酸钾，临用前蒸馏。 1.6 抗坏血酸溶液 100 g/L ：临用前配制。 1.7 氢氧化钾溶液 1+1 , 1.8 氢氧化钠溶液 100 g/1 。 1.9 硝酸银溶液 50 g/L o 1.10 银氨溶液：加氨水至硝酸银溶液 3. 9 中，直至生成的沉淀重新溶解为止，再加氢氧化钠溶液 3.8 数滴，如发生沉淀，再加氨水直至溶解。 1.11 维生素E标准液：a一生育酚 纯度95% Y一生育酚 950o ,S一生育酚 纯度95% 。用脱醛乙醇分别溶解以上三种维生素E标准品，使其浓度大约为1 mL相当于1 mg。 临用前用紫外分光光度计分别标定此三种维生素E溶液的准确浓度。 1. 12 内标溶液：称取苯并「e」芘 纯度98% ，用脱醛乙醇配制成每1 mL相当10 ug苯并「e」芘的内标溶液。 1. 13 pHl-14试纸。 2 仪器与设备 2.1 实验室常用仪器。 2.2 高效液相色谱仪带紫外分光检测器。 2.3 旋转蒸发器 2.4 高速离心机。。 2.5 高纯氮气。 2.6 恒温水浴锅。 2.7 紫外分光光度计。 3 分析步骤 3. 1 试样处理 3.1.1 皂化：准确称取1 g~10 g试样 维生素E各异构体约为40ug 于皂化瓶中，加30 mL无水乙醇，进行搅拌，直到颗粒物分散均匀为止。加5 mL 10%抗坏血酸，苯并[el芘标准液2. 00 mL，混匀。10 mL氢氧化钾 1+1 1混匀。于沸水浴回流30 min使皂化完全。皂化后立即放入冰水中冷却。 3. 1.2 提取：将皂化后的试样移入分液漏斗中，用50 mL水分2次~3次洗皂化瓶，洗液并人分液漏斗中用约100 mL乙醚分两次洗皂化瓶及其残渣，乙醚液并人分液漏斗中。如有残渣，可将此液通过有少许脱脂棉的漏斗滤人分液漏斗。轻轻振摇分液漏斗2 min，静置分层，弃去水层。 3.1.3 洗涤：用约50 mL水洗分液漏斗中的乙醚层，用pH试纸检验直至水层不显碱性 最初水洗轻摇，逐次振摇强度可增加 。 3.1.4 浓缩：将乙醚提取液经过无水硫酸钠 约5 g 滤人与旋转蒸发器配套的250ml一300 mL球形蒸发瓶内，用约100 mL乙醚冲洗分液漏斗及无水硫酸钠3次，并入蒸发瓶内，并将其接至旋转蒸发器上，于55℃水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待瓶中剩下约2 ml乙醚时，取下蒸发瓶，立即用氮气吹掉乙醚立即加人2. 00 mL乙醇，充分混合，溶解提取物。 3. 1.5 将乙醇液移入一小塑料离心管中 4.4.1 离心5 min 5000 r/min 。上清液供色谱分析如果试样中维生素含量过少，可用氮气将乙醇液吹干后，再用乙醇重新定容。并记下体积比。 3.2标准曲线的制备 3.2.1维生素E标准浓度的标定 取各维生素E标准液若干微升，分别稀释至3. 00 mL乙醇中，并分别按给定波长测定各维生素的吸光值。用比吸光系数计算出该维生素的浓度。测定条件如表1所示。 标 准 加入标准液的量 V/uL 比吸光系数 E1% 波长 λ/nm α-生育酚 γ-生育酚 δ-生育酚 100.0 100.0 100.0 71 92.8 91.2 294 298 298 浓度计算按式（1） C1 × × 式中： C1—维生素浓度，单位为克每毫升 g/mL ; A—维生素的平均紫外吸光值; V—加人标准液的量，单位为微升 PI ; E—某种维生素1%比吸光系数; —标准液稀释倍数 3.2.2 标准曲线的制备 本标准采用内标法定量，把一定量的a—生育酚、γ-生育酚、 δ-生育酚及内标苯并〔e」芘液混合均匀。选择合适灵敏度，使上述物质的