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五、讨论 （1）实验的引出 ①本课题组前期研究已经证实缺氧可引起细胞骨架蛋白F-actin的降解[7-8]； ②实验发现法舒地尔具有减轻缺氧引起的神经元轴突缩短的作用，但不能完全逆转缺氧损伤（如图4-D ； ③提出如下假设：是否Rho/ROCK信号通路也参与到神经元的保护作用中？如果参与其中那具体的作用机制又是什么？ [7] Flaiz C. Brain Pathol, 2009, 19 1 : 27-38. [8] 林霓阳. 中国新生儿科杂志, 2008, 23 3 : 156-159. （2）是否Rho/ROCK信号通路也参与到神经元的保护作用中？ ①缺氧后可引起RhoA和ROCK-II蛋白表达量的升高（P 0.05），但对ROCK-I蛋白的表达量却无明显作用； ②法舒地尔作用后，与缺氧组对比RhoA和ROCK-II蛋白表达量降低，但是对于ROCK-I蛋白量的表达却没有显著作用； ③提示法舒地尔对缺氧神经元的保护作用是通过RhoA/ ROCK-II信号通路发挥作用。 （3）具体的作用机制 ①轴突缩短的结构基础是生长锥细胞骨架的回缩及塌陷[9]； ②加入法舒地尔干预后可见细胞骨架F-actin较缺氧组分布变得有规律，可对抗缺氧对细胞骨架的分解作用，促进细胞骨架重组； ③法舒地尔是通过抑制细胞骨架F-actin降解来发挥保护作用。 汕头大学医学院 [9] Gomez TM. J Neurochem, 2014, 129 2 : 221-234. cdc42 rac Rho Rho家族 ROCK MLC ERM MLCP F-actin解聚,细胞骨架重组 轴突回缩，生长锥塌陷 缺氧 图 7 Rho/ROCK信号通路作用示意图 六、结论 （1）Rho/ROCK信号通路激活与新生大鼠神经元缺氧损伤有关； （2）法舒地尔可通过抑制RhoA/ROCK-II信号通路作用于神经元； （3）法舒地尔可减轻缺氧引起的神经元轴突缩短，抑制细胞骨架F-actin降解，从而对新生大鼠缺氧损伤的神经元起保护作用。 汕头大学医学院 七、展望与不足 （1）Rho/ROCK信号通路下游具体是通过什么后续通路及效应分子发挥作用； （2）后续可以脑干或海马等部位神经元为研究对象； （3）可研究其他通路及各通路之间的相互影响 汕头大学医学院 致 谢 首先在此衷心感谢各位答辩委员的聆听。 衷心感谢尊敬的导师林霓阳教授。感谢导师在学业上对我的精心栽培和生活上无微不至的关照！她三年来的呕心沥血，得以我今天的成长。 特别感谢房晓祎主任，本课题从实验开展、到论文写作及临床实践都得到了房晓祎主任的悉心指导和关心！ 衷心感谢科室的各位主任、老师及师兄师姐们在临床实践中给予的指导与帮助！ 最后，再次感谢我的导师林霓阳教授，并向所有关心、指导、帮助和支持过我的老师、同学和朋友致以最诚挚的谢意！ 衷心感谢 答辩委员会的各位老师！ Rho/ROCK信号通路介导新生大鼠神经元缺氧损伤的作用机制研究 答 辩 人 ：张 衡 专 业 ：儿 科 学 年 级 ： 2012 级 导 师 ：林 霓 阳 教 授 汕头大学医学院 一、研 究 背 景 二、研 究 目 的 三、实 验 方 法 四、实 验 结 果 七、展望与不足 五、讨 论 六、结 论 汕头大学医学院 一.研究背景 新生儿缺氧缺血性脑病 hypoxia ischemic encephalopathy, HIE ，是由于围生期窒息缺氧所致新生儿缺氧缺血性脑损伤（hypoxia ischemic brain damage, HIBD）。 HIE的近期不良预后是早期新生儿死亡，远期不良预后多为脑神经损害的后遗症。后遗症常见的有发育迟缓、智力低下、痉挛性瘫痪、癫痫等。 汕头大学医学院 近年来研究发现： （1）神经元细胞骨架降解是导致缺氧缺血性脑损伤的重要环节[1]； （2）神经元细胞骨架降解受Rho及其下游效应物ROCK Rho-associated coiled-coil kinase 的调控[2]； （3）Rho/ROCK激活可使细胞骨架肌动蛋白（F-actin）重组 ，生长锥塌陷，促进细胞凋亡，抑制神经再生[3]。 汕头大学医学院 [1] Sit ST. J Cell Sci,?2011, 124 Pt 5 : 679-683. [2] Thumkeo D. Eur J Cell Biol, 2013, 92 10-11 : 303-315. [3] Philip Duffy. J Neurosci, 2009, 29 48 : 15266–15276. 1.Rho 现已发现的Rho家族主要成员有RhoA、RhoB、RhoC 等,其中最重要的是RhoA[